dc.contributor.author | Bonomo, Jéssica Hilário | |
dc.date.accessioned | 2019-03-27T11:55:28Z | |
dc.date.available | 2019-03-27T11:55:28Z | |
dc.date.issued | 2018-08-31 | |
dc.identifier.citation | BONOMO, Jéssica Hilário. Clonagem e expressão heteróloga de proteínas estruturais (C, prM, E) de Zika Virus (ZIKV). 2018. Dissertação (Mestrado em Genética Evolutiva e Biologia Molecular) – Universidade Federal de São Carlos, São Carlos, 2018. Disponível em: https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/11133. | * |
dc.identifier.uri | https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/11133 | |
dc.description.abstract | Viruses are organisms which depend on the host cellular machinery to replicate,
and are relevant to human, livestock and plant health. The modern threat of emerging
pandemics is pressing and, in this scenario, Zika Virus (ZIKV) is an important recent
example, due to recent epidemics and confirmation of its involvement in congenital
development and neurological manifestations. The ability to produce recombinant virus
like particles (VLPs) and recombinant proteins can lead to the understanding of its
structure and the development of new therapeutic approaches, as well as the
understanding of interaction mechanisms between the virion and host cell. This study
aims to achieve heterologous production of ZIKV VLPs as well as ZIKV Capsid protein
for future structural analysis and to make them available to the research community. A
recombinant construct containing the three structural proteins of ZIKV (C, prM and E)
cloned into pPICZα vector was integrated in Pichia pastoris genome for AOX1 promoter
induced expression. C protein coding region was cloned into Escherichia coli expression
vector for separate expression and purification by affinity chromatography using a 6xHis
tag construct. Integration of the coding region for the proteins C, prM and E in the P.
pastoris genome was confirmed via PCR and sequencing. Results showed the possibility
of obtaining soluble secreted recombinant product. Production of isolated C protein was
achieved in E. coli and its purification was performed through affinity chromatography. | eng |
dc.description.sponsorship | Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) | por |
dc.description.sponsorship | Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) | por |
dc.description.sponsorship | Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) | por |
dc.language.iso | por | por |
dc.publisher | Universidade Federal de São Carlos | por |
dc.rights.uri | Acesso aberto | por |
dc.subject | Vírus da Zika | por |
dc.subject | Capsídeo | por |
dc.subject | Proteína recombinante | por |
dc.subject | Zika virus | eng |
dc.subject | Capsid | eng |
dc.subject | Recombinant protein | eng |
dc.subject | VLP | eng |
dc.title | Clonagem e expressão heteróloga de proteínas estruturais (C, prM, E) de Zika Virus (ZIKV) | por |
dc.title.alternative | Clonning and heterologous expression of structural proteína (C, prM, E) of Zika Virus (ZIKV) | eng |
dc.type | Dissertação | por |
dc.contributor.advisor1 | Thiemann, Otávio Henrique | |
dc.contributor.advisor1Lattes | http://lattes.cnpq.br/4933022274560322 | por |
dc.contributor.advisor-co1 | Watanabe, Tatiana Faria | |
dc.contributor.advisor-co1Lattes | http://lattes.cnpq.br/9848838432291230 | por |
dc.description.resumo | Vírus são organismos que dependem da maquinaria celular de hospedeiro para
sua replicação, e são relevantes para a saúde humana, de animais e plantas. A ameaça
moderna de pandemias emergentes é urgente e, nesse cenário, o Zika virus (ZIKV) é
um novo exemplo importante, devido a epidemias recentes e a confirmação de seu
envolvimento no desenvolvimento congênito e manifestações neurológicas. A
capacidade de produzir partículas tipo vírus (VLP, do inglês viruslike particles) e
proteínas virais recombinantes pode levar ao melhor entendimento de sua estrutura e ao
desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas, assim como o entendimento de
mecanismos de interação entre vírion e célula hospedeira. Esse estudo tem como
objetivo obter a expressão heteróloga de VLPs de ZIKV, assim como proteína do
Capsídeo (C) de ZIKV para futuras análises estruturais e para viabilizálas para a
comunidade científica. Uma construção recombinante contendo as três proteínas
estruturais de ZIKV (C, prM e E) clonada em vetor pPICZα foi integrada ao genoma de
Pichia pastoris para a expressão induzida sob o promotor AOX1. A região codificante da
proteína C foi clonada em vetor de expressão de Escherichia coli para expressão da
proteína isolada e purificação por cromatografia de afinidade utilizando uma sequência
de histidinas (6xHis). A integração da região codificante das proteínas C, prM e E foi
confirmada por PCR e sequenciamento de nucleotídeos. Resultados mostraram a
possibilidade da obtenção de proteínas recombinantes solúveis. A produção da proteína
C isolada em E. coli foi confirmada e sua purificação realizada através de cromatografia
de afinidade. Estes resultados abrem caminho para a produção recombinante de ZIKV
que poderão contribuir para o futuro desenvolvimento de terapias eficazes contra a
infecção. | por |
dc.publisher.initials | UFSCar | por |
dc.publisher.program | Programa de Pós-Graduação em Genética Evolutiva e Biologia Molecular - PPGGEv | por |
dc.subject.cnpq | CIENCIAS BIOLOGICAS::MICROBIOLOGIA::BIOLOGIA E FISIOLOGIA DOS MICROORGANISMOS::VIROLOGIA | por |
dc.subject.cnpq | CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA::BIOLOGIA MOLECULAR | por |
dc.subject.cnpq | CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA | por |
dc.description.sponsorshipId | CNPq: 132604/2016-7 | por |
dc.ufscar.embargo | Online | por |
dc.publisher.address | Câmpus São Carlos | por |
dc.contributor.authorlattes | http://lattes.cnpq.br/9050818325875009 | por |