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Potencial antitumoral das proteínas TRAIL e IL-2 expressas e veiculadas por Salmonella Typhimurium atenuada em modelo de câncer colorretal
dc.contributor.author | Camillo, Luciana | |
dc.date.accessioned | 2022-10-14T11:43:59Z | |
dc.date.available | 2022-10-14T11:43:59Z | |
dc.date.issued | 2019-10-14 | |
dc.identifier.citation | CAMILLO, Luciana. Potencial antitumoral das proteínas TRAIL e IL-2 expressas e veiculadas por Salmonella Typhimurium atenuada em modelo de câncer colorretal. 2019. Tese (Doutorado em Genética Evolutiva e Biologia Molecular) – Universidade Federal de São Carlos, São Carlos, 2019. Disponível em: https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/16873. | * |
dc.identifier.uri | https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/16873 | |
dc.description.abstract | Colorectal cancer is the third most diagnosed malignant disease and the fourth leading cause of cancer-related deaths in the world. Cancer treatments are not fully effective and low selectivity to tumor tissue has marked side effects, so there is a high importance of studies that seek new alternatives for the treatment of this disease. In this work we use an attenuated strain of Salmonella as a live bacterial vector, which prefers to invade the tumor microenvironment and can produce heterologous proteins with immunotherapeutic potential. The objectives were to develop plasmids and insert them into the attenuated Salmonella SL3261, containing the genes that encode tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) and Interleukin 2 (IL-2); and evaluate, in vitro and in vivo, the antitumor potential of these strains in colorectal tumor (HCT-8 strain). Confirmation of protein construction and expression was done by electrophoresis, Western Blot and ELISA, with anti-TRAIL and anti-IL-2 monoclonal antibodies. The effect on HCT-8 was determined by the cytotoxicity test (MTT), Griess reaction and apoptosis assay (Annexin V). To analyze tumor progression in vivo, mice received tumor cells and, after tumor implantation, were treated with the constructed strains. Tumor size was calculated every three days and tumor weight was determined after euthanasia. The results demonstrated that the expression vector construction was effective and the proteins were expressed by SL3261. In vitro tests showed decreased viability and increased cell death in groups treated with SL3261_TRAIL and SL3261_IL-2 when compared to control groups, and nitric oxide production. Regarding the in vivo tests, the SL3261, SL3261_TRAIL and SL3261_MIX (TRAIL + IL-2) treatments showed antitumor effect in this model, since they presented decreased tumors compared to the untreated control 14 days after treatment. Thus, it is suggested that TRAIL and IL-2, expressed by SL3261, have antitumor effect in the colorectal cancer model, proposing a possible immunotherapy against this type of tumor. | eng |
dc.description.sponsorship | Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) | por |
dc.language.iso | por | por |
dc.publisher | Universidade Federal de São Carlos | por |
dc.rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil | * |
dc.rights.uri | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/ | * |
dc.subject | Imunoterapia | por |
dc.subject | Salmonella SL3261 | por |
dc.subject | TRAIL | por |
dc.subject | Interleucina-2 | por |
dc.subject | Vetor bacteriano vivo | por |
dc.subject | Immunotherapy | eng |
dc.subject | Interleukin-2 | eng |
dc.subject | Live bacterial vector | eng |
dc.title | Potencial antitumoral das proteínas TRAIL e IL-2 expressas e veiculadas por Salmonella Typhimurium atenuada em modelo de câncer colorretal | por |
dc.title.alternative | Antitumor potential of attenuated Salmonella-expressed TRAIL and IL-2 proteins in colorectal cancer model | eng |
dc.type | Tese | por |
dc.contributor.advisor1 | Anibal, Fernanda de Freitas | |
dc.contributor.advisor1Lattes | http://lattes.cnpq.br/4918261968772806 | por |
dc.contributor.advisor-co1 | Silva, Adilson José da | |
dc.contributor.advisor-co1Lattes | http://lattes.cnpq.br/3447469350644179 | por |
dc.description.resumo | O câncer colorretal é a terceira doença maligna mais diagnosticada e a quarta principal causa de mortes relacionadas ao câncer no mundo. Os tratamentos contra o câncer não se mostram totalmente eficazes e a baixa seletividade ao tecido tumoral traz efeitos colaterais marcantes, por isso a importância de estudos que buscam novas alternativas para o tratamento dessa doença. Neste trabalho foi utilizada uma linhagem atenuada de Salmonella como vetor bacteriano vivo, a qual apresenta preferência por invadir o microambiente tumoral e nele produzir as proteínas heterólogas com potencial imunoterapêutico. Os objetivos se pautaram em desenvolver plasmídeos e inseri-los na Salmonella atenuada SL3261, contendo os genes que codificam o ligante indutor de apoptose relacionado ao fator de necrose tumoral (TRAIL) e a Interleucina 2 (IL-2); e avaliar, in vitro e in vivo, o potencial antitumoral dessas linhagens em tumor colorretal (linhagem HCT-8). A confirmação da construção e expressão das proteínas foi realizada em eletroforese, Western Blot e ELISA, com anticorpos monoclonais anti-TRAIL e anti-IL-2. O efeito em HCT-8 foi determinado pelo teste de citotoxicidade (MTT), reação de Griess e ensaio de apoptose (Anexina V). Para analisar a progressão tumoral in vivo, camundongos receberam células tumorais e, após a implantação do tumor, foram tratados com as linhagens construídas. O tamanho dos tumores foi calculado a cada três dias e o peso dos tumores foi determinado após a eutanásia. Os resultados demonstraram que a construção do vetor de expressão se mostrou eficaz e as proteínas foram expressas pela SL3261. Os testes in vitro mostraram diminuição da viabilidade e aumento da morte celular nos grupos tratados com as linhagens SL3261_TRAIL e SL3261_IL-2 quando comparados aos grupos controles, e houve produção de óxido nítrico. Em relação aos testes in vivo, os tratamentos com SL3261, SL3261_TRAIL e SL3261_MIX (TRAIL + IL-2) apresentaram efeito antitumoral neste modelo, uma vez que apresentaram tumores diminuídos em relação ao controle não tratado, 14 dias após o tratamento. Assim, sugere-se que TRAIL e IL-2, expressas por SL3261, apresentam efeito antitumoral no modelo de câncer colorretal, propondo uma possível imunoterapia contra esse tipo de tumor. | por |
dc.publisher.initials | UFSCar | por |
dc.publisher.program | Programa de Pós-Graduação em Genética Evolutiva e Biologia Molecular - PPGGEv | por |
dc.subject.cnpq | CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA::BIOLOGIA MOLECULAR | por |
dc.subject.cnpq | CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA | por |
dc.subject.cnpq | CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA | por |
dc.description.sponsorshipId | Código de Financiamento 001 | por |
dc.publisher.address | Câmpus São Carlos | por |
dc.contributor.authorlattes | http://lattes.cnpq.br/1782925261548587 | por |