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dc.creatorCastilho, Priscila Vasques
dc.date.accessioned2016-06-02T20:21:32Z
dc.date.available2004-08-15
dc.date.available2016-06-02T20:21:32Z
dc.date.issued2004-01-01
dc.identifier.citationCASTILHO, Priscila Vasques. Expressão heterológa, purificação e caracterização estrutural do peptídeo (171-194) da p24 do HIV-1.. 2004. 92 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de São Carlos, São Carlos, 2004.por
dc.identifier.urihttps://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/5523
dc.description.abstractProteins from the inner core of HIV-1 are involved in crucial processes during the virus life cycle. p24 is the major capsid protein of HIV and is initially expressed as part of the gag polyprotein. The association of gag proteins to the cell inner-membrane surface initiates virus assembly and induces budding from the host cell membrane. Thus, p24 plays an active structural role both as part of the Gag protein and in its mature form. In this sense, we have chosen a region from C-terminal of p24, TLRAEQASQEVKNWMTETLLVQNA, (p24-3) which is part of the major region responsible for protein dimerization. The linear peptide, rp24-3, and its cyclic variant, rp24-3m, were produced by recombinant strategy in Escherichia coli. The gene fragments were obtained by the synthetic gene approach and inserted into pET 32a to produce fusion proteins in the soluble form. The expression products were purified by Ni-affinity chromatography followed by an enzymatic cleavage. The peptides where purified by reverse phase chromatography and their primary sequence and molecular masses where inferred by amino acid sequence analysis and mass spectrometry, respectively. The rp24-3 secondary structure was investigated by circular dichroism and steady state fluorescence, been structured differently in water and in buffer. Besides, its tryptophan is in a partially buried environment and the addition of methanol above 70% caused a highly increase in helical content. In conclusion, this work shows a suitable system for rp24-3 production, providing satisfactory amount for structural studies.eng
dc.formatapplication/pdfpor
dc.languageporpor
dc.publisherUniversidade Federal de São Carlospor
dc.rightsAcesso Abertopor
dc.subjectGenética molecularpor
dc.subjectExpressão heterólogapor
dc.subjectPeptídeopor
dc.subjectp24por
dc.subjectHIV-1por
dc.titleExpressão heterológa, purificação e caracterização estrutural do peptídeo (171-194) da p24 do HIV-1.por
dc.typeDissertaçãopor
dc.contributor.advisor1Araújo, Ana Paula Ulian de
dc.contributor.advisor1Latteshttp://genos.cnpq.br:12010/dwlattes/owa/prc_imp_cv_int?f_cod=K4721738E1por
dc.creator.Latteshttp://genos.cnpq.br:12010/dwlattes/owa/prc_imp_cv_int?f_cod=K4776494Y3por
dc.description.resumoAs proteínas do centro do HIV-1 estão envolvidas em processos cruciais durante o ciclo de vida viral. A p24 é a principal proteína do capsídeo do HIV e é inicialmente expressa como parte da poliproteína Gag. A associação das proteínas Gag na superfície da membrana interna da célula hospedeira dá início à montagem viral e desencadeia o processo de brotamento da membrana da célula hospedeira. Dessa forma, a p24 possui um importante papel estrutural tanto no contexto da Gag, como na sua forma madura. Nesse sentido, foi escolhido um peptídeo da região C-terminal da p24, TLRAEQASQEVKNWMTETLLVQNA, (p24-3) que compõe a região principal responsável pela dimerização da proteína p24. O peptídeo linear, rp24-3, e sua variante cíclica, rp24-3m, foram produzidos em Escherichia coli via estratégia recombinante. Os fragmentos gênicos foram obtidos por meio da montagem de genes sintéticos e foram inseridos no vetor pET 32a para a produção como proteínas de fusão na forma solúvel. Os produtos expressos foram purificados por cromatografia de afinidade em Ni e submetidos a uma clivagem enzimática. Os peptídeos foram então purificados por cromatografia em fase reversa e suas sequências primárias e massas moleculares foram inferidas por meio do sequenciamento de aminoácidos e análises por espectrometria de massa, respectivamente. A estrutura secundária do rp24-3 foi investigada por dicroísmo circular e fluorescência estática, mostrando-se estruturado diferentemente em água e em PBS. Além disso, o triptofano está em um ambiente parcialmente escondido. A adição de metanol acima de 70% causou um grande aumento no conteúdo de hélices. Concluíndo, este trabalho mostra um sistema viável para a produção do rp24-3, proporcionando quantidades necessárias para a realização de estudos estruturais.por
dc.publisher.countryBRpor
dc.publisher.initialsUFSCarpor
dc.publisher.programPrograma de Pós-graduação em Genética Evolutiva e Biologia Molecularpor
dc.subject.cnpqCIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICApor


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