UNIVERSIDADE FEDERAL DE SÃO CARLOS  

CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E DA SAÚDE  

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM GENÉTICA E EVOLUÇÃO 

  

  

 

 

  

ANÁLISES FILOGEOGRÁFICAS DE EXAERETE SMARAGDINA 

(Guérin-Méneville, 1845) (HYMENOPTERA, APIDAE, 

EUGLOSSINI) E SUA HOSPEDEIRA EULAEMA NIGRITA 

(Lepeletier, 1841) (HYMENOPTERA, APIDAE, 

EUGLOSSINI) E O STATUS DE EXAERETE LEPELETIERI 

(Oliveira & Nemésio, 2003). 

  

  

 

  

 Otávio Lino e Silva 

  

 

SÃO CARLOS  

2009 



UNIVERSIDADE FEDERAL DE SÃO CARLOS  

CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E DA SAÚDE  

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM GENÉTICA E EVOLUÇÃO 

  

  

  

 ANÁLISES FILOGEOGRÁFICAS DE EXAERETE SMARAGDINA 

(Guérin-Méneville, 1845) (HYMENOPTERA, APIDAE, 

EUGLOSSINI) E SUA HOSPEDEIRA EULAEMA NIGRITA 

(Lepeletier, 1841) (HYMENOPTERA, APIDAE, 

EUGLOSSINI) E O STATUS DE EXAERETE LEPELETIERI 

(Oliveira & Nemésio, 2003). 

  

Otávio Lino e Silva 

Dissertação apresentada ao 
Programa de Pós-Graduação 
em Genética e Evolução da 
Universidade Federal de São 
Carlos como parte dos 
requisitos para a obtenção 
do Título de Mestre em 
Genética e Evolução, Área 
de Concentração: Genética e 
Evolução. 

  

Orientador: Prof. Dr. Marco 
Antonio Del Lama 

 

 

SÃO CARLOS  

2009 



 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

Ficha catalográfica elaborada pelo DePT da 
Biblioteca Comunitária da UFSCar 

 
 
 
 L758af 

 
Lino e Silva, Otávio. 
    Análises filogeográficas de Exaerete smaragdina (Guérin-
Méneville, 1845) (Hymenoptera, Apidae, Euglossini) e sua 
hospedeira Eulaema nigrita (Lepeletier, 1841) 
(Hymenoptera, Apidae, Euglossini) e o status de Exaerete 
lepeletieri (Oliveira & Nemésio, 2003) / Otávio Lino e Silva. -- 
São Carlos : UFSCar, 2009. 
    57 f. 
 
    Dissertação (Mestrado) -- Universidade Federal de São 
Carlos, 2009.  
  
    1. Genética de populações. 2. Genética. 3. Abelha. 4. 
Parasitismo. 5. Evolução. I. Título. 
 
 
                                                      CDD: 575.15 (20a) 
 

 



UNIVERSIDADE FEDERAL DE SÃO CARLOS
CENTRO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS E DA SAÚDE

PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM GENÉTICA E EVOLUÇÃO

Análises tilogeográticas de Exaerete smaragdina (Guérin-Méneville, 1845)
(Hymenoptera, Apidae, Euglossini) e sua hospedeira Eu/aema nigrita (Lepeletier,

1841) (Hymenoptera, Apidae, Euglossini) e o status de Exaerete /epe/etieri (Oliveira
& Nemésio, 2003)

Dissertação de Mestrado de Otávio Uno e Silva

Banca Examinadora

Prat. Dr. Reinaldo Alves de Brito

Prat. Dr. Marco Antonio Dei Lama

Prof. Dr. Fernando Amaral da Silveira



 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

"Um homem precisa viajar por sua conta (...) 
Precisa viajar por si, com seus olhos e pés, 

para entender o que é seu (...)"  
 

Amyr Klink 
 
 
 
 

Conhece-te a ti mesmo e conhecerás 
o universo e os deuses. 

 
Sócrates 



 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 
 

Dedico este trabalho aos meus pais, Nilson e 
Lúcia, e aos meus irmãos, Gabriel e Gustavo.  

A eles, pelo amor e pela paciência. 



Agradecimentos 

Eis a parte mais importante deste trabalho. Sem estas 

pessoas, individualmente ou no conjunto, muito ou pouco, de 

perto ou não, certamente nada do que virá nas próximas 

páginas estaria hoje concretizado e verbalizado. 

De tão importante, decidi que não caberia a mim 

escolher as palavras que as agradeceria. Passei a 

responsabilidade a um garoto e uma raposa, de um livro que 

leio desde criança. 

 

 Aos meus pais Nilson e Lúcia e aos meus irmãos 

Gabriel e Gustavo. Vocês serão sempre como a flor. “Se tu 

amas uma flor que se acha numa estrela, é doce, de noite, 

olhar o céu. Todas as estrelas estão floridas." 

 

Ao meu orientador Marco Antônio Del Lama. "Foi o tempo 

que dedicaste à tua rosa que fez tua rosa tão importante.". 

E tenho certeza que ele me diria: “Nunca estamos contentes 

onde estamos." (talvez na segunda pessoa do singular!). Mas 

acredito que concluiríamos juntos: “O significado das 

coisas não está nas coisas em si, mas sim em nossa atitude 

com relação a elas”. 

 

A todos os meus professores. “Há milhões e milhões de 

anos que as flores fabricam espinhos. Há milhões e milhões 

de anos que os carneiros as comem, apesar de tudo. E não 

será sério procurar compreender por que perdem tanto tempo 

fabricando espinhos inúteis? Não terá importância a guerra 

dos carneiros e das flores?” 

 

À minha namorada, amiga e companheira, Loany. "Se 

alguém ama uma flor da qual só existe um exemplar em 

milhões de estrelas, isso basta para que seja feliz quando 

a contempla." 

 



Aos meus amigos e companheiros de laboratório e do 

departamento de Genética: Camila, Carol Mino, Cintia, 

Iderval, Isabel, Juliana, Juliano, Kátia, Keize, Luana, 

Mariana, Naná, Regina, Rogério, Samanta, Thais, Thais 

Collet. “Aqueles que passam por nós, não vão sós, não nos 

deixam sós. Deixam um pouco de si, levam um pouco de nós." 

 

Aos meus amigos de longa data: João, Fabinho e Xandão. 

Aos meus amigos distantes (geograficamente): Aninha, Diego 

e Gisele. E aos grandes amigos da Biologia: Pedro, Marcelo, 

Cammy, Marina, Lia, Giovana, Val, Naná, Raquel, Julia, 

Helena, André, Andressa, Lorão, Grá e todos aqueles que 

compartilharam destes últimos tantos anos. A alguns eu 

diria: “É preciso que eu suporte duas ou três larvas se 

quiser conhecer as borboletas. Dizem que são tão belas!”. A 

outros: "Para enxergar claro, bastar mudar a direção do 

olhar.". E a todos: “Num mundo que se faz deserto, temos 

sede de encontrar um amigo.”. Tenho vocês! 

 

Ao programa de Pós-Graduação em Genética e Evolução e 

à Capes (pela bolsa concedida). "Não exijas de  ninguém 

senão aquilo que realmente pode dar." 

 

 

 

 

 

 

 

Frases de “O Pequeno Príncipe” 

de A. de Saint Exupéry



 

Resumo 
A tribo Euglossini possui cerca de 200 espécies de 

abelhas descritas, distribuídas em cinco gêneros 

considerados monofiléticos. Os gêneros Exaerete e Aglae 

apresentam comportamento cleptoparasita, atacando outras 

espécies de Euglossini. Para a espécie Exaerete smaragdina, 

os únicos relatos na literatura referem-se ao parasitismo 

de Eulaema nigrita. Porém, há indícios de que esta não seja 

sua única hospedeira. Desta forma, a filogeografia destas 

duas espécies foi comparada, com o intuito de analisar se 

há concordância entre as suas histórias evolutivas, pois, 

quanto maior a obrigatoriedade da relação parasita-

hospedeiro, mais congruente espera-se que sejam suas 

filogeografias. Para Ex. smaragdina, foram observadas 

populações estruturadas geograficamente e os testes de 

neutralidade não foram significantes. Para El. nigrita, não 

foi observada estruturação populacional, havendo uma baixa 

variabilidade genética e a maioria das populações 

compartilhando um mesmo haplótipo. Estes dados, associados 

a testes de neutralidade estatisticamente significantes, 

indicam que as populações desta espécie sofreram uma 

expansão populacional recente. A comparação dos padrões 

filogeográficos indica ainda que El. nigrita não deva ser a 

única hospedeira de Ex. smaragdina. Também foi analisado o 

status de espécie da Exaerete lepeletieri, considerada 

recentemente uma sinonímia de Ex. frontalis. Os resultados 

indicam que Ex. lepeletieri apresenta monofilia para o loco 

16S, enquanto dois clados foram observados para o loco 

Citocromo B (CytB). 

  

 



 Lista de Tabelas 

Tabela 1: Localidades amostradas no presente estudo, 
seguidas da sigla do estado e da região geográfica, quando 
referentes ao Brasil, ou pelo nome do país quando não. As 
amostras de outros países, com exceção de Villavencio (CO), 
foram extraídas do trabalho de Dick et al. (2004). O código 
refere-se à abreviatura utilizada no mapa (Figura 6), onde 
as localidades estão designadas segundo sua latitude e 
longitude. Para cada localidade está representado o número 
de indivíduos analisados para cada loco e espécie.  Pág. 16 

Tabela 2 – Primers utilizados para amplificação por PCR dos 
locos analisados neste trabalho e seus respectivos autores.                                        

Pág. 18 

Tabela 3: Composição nucleotídica dos locos 16s, Citocromo 
B e COI para Exaerete smaragdina.                   Pág. 23 
 
Tabela 4 – Índices de diversidade gênica (variância) para 
os locos analisados em Exaerete smaragdina.         Pág. 23 
 
Tabela 5 – Valores obtidos para os testes de neutralidade 
de Tajima (D) e Fu (Fs) e os respectivos valores de P 
(entre parênteses) para os três locos analisados de 
Exaerete smaragdina.                                Pág. 24 
 
Tabela 6 – Valores obtidos para a AMOVA a partir dos locos 
concatenados 16S e CytB para Exaerete smaragdina.   Pág. 30 
 
Tabela 7: Composição nucleotídica dos locos Citocromo B e 
COI para Eulaema nigrita.                           Pág. 30 
 

Tabela 8: Índices de diversidade gênica (variância) para os 
locos analisados em Exaerete smaragdina.            Pág. 31 
 
Tabela 9 - Valores obtidos para os testes de neutralidade 
de Tajima (D) e Fu (Fs) e seus respectivos valores de P 
para os dois locos analisados de Eulaema nigrita.   Pág. 31 
 
Tabela 10 – Valores obtidos para a AMOVA a partir dos locos 
concatenados COI e CytB de Eulaema nigrita.         Pág. 35 
 

Tabela 11 - Diversidade genética (desvio padrão, 5.000 
reamostragens) observada para as 3 espécies para 364pb do 
gene mitocondrial Citocromo B.                      Pág. 38 
 
Tabela 12 - Diversidade nucleotídica e número médio de 
substituições (desvio padrão, 5.000 reamostragens) 
observada para as três espécies para 463pb do gene 
mitocondrial 16S.                                   Pág. 38 
 



Tabela 13 – Diagonal inferior: Diversidade genética (Desvio 
padrão, 5.000 re-amostragens) observada entre as 3 espécies 
para 364pb do gene mitocondrial  Citocromo B. Diagonal 
superior: Fst par-a-par (Desvio padrão, 5.000 re-
amostragens) observada entre as 3 espécies para 364pb do 
gene mitocondrial Citocromo B.                      Pág. 39 
 
Tabela 14 – Diagonal inferior: Diversidade genética (Desvio 
padrão, 5.000 re-amostragens) observada entre as 3 espécies 
para 463pb do loco mitocondrial  16S. Diagonal superior: 
Fst par-a-par (Desvio padrão, 5.000 re-amostragens) 
observada entre as 3 espécies para 463pb do gene 
mitocondrial Citocromo B.                           Pág. 39 
 



Lista de Figuras 
 
Figura 1: Machos dos cinco gêneros de Euglossini. (a) 
Euglossa mixta. (b) Euglossa sp. com a probóscide 
extendida. (c) Eufriesea pulchra. (d) Eulaema meriana. (e) 
Exaerete frontalis. (f) Aglae caerulea. Fotos de E. Ross. 
Extraído de Cameron (2004).                          Pág. 2 
 
Figura 2. Relações filogenéticas do grupo de abelhas 
corbiculadas, estabelecidas a partir dos genes citocromo B, 
16S, 28S e opsina, usando grupos externos. O asterisco ao 
lado do nome da tribo indica que, para aquela filogenia, 
esta tribo não demonstrou ser monofilética. Extraído de 
Cameron & Mardulyn (2001).                           Pág. 4 
 
Figura 3. Relações filogenéticas entre os gêneros da tribo 
Euglossini. (a) Primeira e (b) Segunda filogenias propostas 
por Kimsey (1982, 1987) com base em caracteres 
morfológicos; (c) filogenia de Michener, também baseada em 
caracteres morfológicos; (d) filogenia de Engel (1999) com 
base na morfologia e dados de fósseis; (e) filogenia 
molecular baseada nas sequências de quatro genes reportadas 
por Michel-Salzat et al. (2004) e em dados morfológicos de 
Oliveira (2000).                                     Pág. 5 
 
Figura 4. Relações filogenéticas das espécies de Exaerete. 
Retirada de Anjos-Silva et al. (2007). Pontos pretos 
indicam mudanças únicas e não ambíguas; pontos brancos 
indicam reversões e convergências.                   Pág. 8 
 
Figura 5. Células de Eulaema nigrita sendo aprovisionadas 
(a, b) e parasitada (c) por Exaerete smaragdina. A seta (d) 
indica a marca deixada pelo orifício aberto para a 
oviposição por Exaerete smaragdina. Extraído de Garófalo & 
Rozen (2001).                                       Pág. 10 
 
Figura 6: Mapa com as localidades amostradas neste 
trabalho. Os códigos referem-se ao nome de cada localidade, 
referidas na Tabela 1.                              Pág. 17 
 
Figura 7: Análise da reconstrução filogenética para a 
espécie Exaerete smaragdina. Acima: à esquerda, loco 16S, e 
à direita CytB. Ao lado loco COI. Análises feitas a partir 
do método de Neighbour-Joining, com 5000 réplicas.  Pág. 27 
 
Figura 8 – Análise filogenética de Neighbour-Joining (5000 
réplicas) para os locos 16S, CytB e COI concatenados 
(1246pb) de Exaerete smaragdina.                    Pág. 28 
 
Figura 9 – Análise de clados aninhados para o loco COI das 
amostras analisadas da espécie Exaerete smaragdina. Pág. 29 
 



Figura 10: Análise da reconstrução filogenética para a 
espécie Eulaema nigrita. À esquerda, loco COI, e à direita 
CytB. Análises feitas a partir do método de Neighbour-
Joining, com 5000 réplicas.                         Pág. 33 
 
Figura 11 – Análise filogenética de Neighbour-Joining (5000 
réplicas) para os locos  CytB e COI concatenados (832pb) de 
Eulaema nigrita.                                    Pág. 34 
 
Figura 12 – Rede de haplótipos para o loco COI de Eulaema 
nigrita: (PAN: Panamá, GFRC: Guiana Francesa, RIF: Rifaina, 
SC: São Carlos, MAN: Manaus, VIC: Viçosa, GUAR: Guarapari, 
JPES: João Pessoa, UBAT: Ubatuba, CAC: Cáceres).    Pág. 34 
 

Figura 13 – Análise de clados aninhados para o loco CytB de 
Eulaema nigrita. (RIF: Rifaina, SC: São Carlos, MAN: 
Manaus, MARL: Marliéria, JPES: João Pessoa, GUAR: 
Guarapari, UBAT: Ubatuba, CAC: Cáceres, CGUI: Chapada dos 
Guimarães, CRIS: Cristalino, VIC: Viçosa).          Pág. 35 
 

Figura 14 – Reconstrução filogenética para o loco 16S para 
as espécies Ex. smaragdina, Ex. frontalis e para a possível 
espécie Ex. lepeletieri, pelo método de Neighbour-Joining 
(5000 réplicas).                                    Pág. 41 
 
Figura 15 – Reconstrução filogenética para o loco Citocromo 
B para as espécies Ex. smaragdina, Ex. frontalis e para a 
possível espécie Ex. lepeletieri, pelo método de Neighbour-
Joining (5000 réplicas).                            Pág. 41 
 
 
 
 
 
 

 

 

  
 
 
 
 

 

  

   



SUMÁRIO 

1 Introdução 1 

1.1 As abelhas Euglossíneas 1 

1.2 Origem da tribo Euglossini 3 

1.3 Relações filogenéticas dentro da tribo Euglossini 5 

1.4 Caracterização do gênero Exaerete 6 

1.5 Origem do cleptoparasitismo em Euglossini 8 

2 Objetivos 13 

3 Material e Métodos 15 

3.1 Material 15 

3.2 Extração de DNA e amplificação 15 

3.3 Seqüenciamento do DNA mitocondrial 18 

3.4 Análises populacionais 19 

3.5 Análises filogeográficas 20 

3.6 Análises filogenéticas de Ex. lepeletieri 21 

4 Resultados e Discussão 22 

4.1 Diversidade genética das populações de Exaerete 

smaragdina 

 

22 

4.2 Estrutura genética e filogeografia das populações 

de Exaerete smaragdina 

 

24 

4.3 Diversidade genética das populações de Eulaema 

nigrita 

 

30 

4.4 Estrutura genética e filogeografia das populações 

de Eulaema nigrita 

 

32 

4.5 Comparação entre os aspectos filogeográficos de 

Ex. smaragdina e sua hospedeira El. nigrita 

 

36 

4.6 Análise do status de espécie de Exaerete 

lepeletieri baseado em caracteres genéticos 

 

38 

5 Considerações finais e perspectivas 42 

5.1 Estudos filogeográficos na América do Sul 42 

5.2 Filogeografia comparada em sistemas parasita-

hospedeiro 

 

42 

5.3 Determinação do status de espécie por marcadores 

moleculares 

 

43 

6 Referências bibliográficas 45 



 

1 

 

1. INTRODUÇÃO 

1.1. As abelhas Euglossíneas 

A fauna brasileira apresenta, aproximadamente, 1600 

espécies de abelhas pertencentes às famílias Colletidae, 

Halictidae, Andrenidae, Megachilidae e Apidae (Silveira et 

al. 2002). Dentre esta diversidade de abelhas, encontram-se 

as abelhas da tribo Euglossini, distribuídas do México ao 

centro da Argentina (Michener 2000) e que chegam a 

constituir até 25% da diversidade de abelhas em algumas 

matas (Roubik & Hanson 2004). 

Desde a compilação das 122 espécies de Euglossini 

descritas até 1967 (Moure 1967), cerca de 45 novas espécies 

foram catalogadas até 1986 (Kimsey & Dressler 1986). Em 

2004, o número de espécies já atingia a marca de 187 

(Roubik & Hanson 2004) e novas espécies continuam sendo 

identificadas (Oliveira 2006; Oliveira & Nemésio 2003; 

Anjos-Silva & Rebelo 2006; Nemésio 2009). 

As cerca de 200 espécies reconhecidas atualmente estão 

distribuídas em cinco gêneros: Euglossa (114 spp.), 

Eufriesea (62 spp.), Eulaema (18 spp.), Exaerete1, (7 spp.) 

e Aglae (1 sp.)(Figura 1) , sendo os dois últimos 

cleptoparasitas de outras espécies de Euglossini. 

A tribo Euglossini constitui parte do grupo de abelhas 

corbiculadas, um grupo monofilético dentro da família 

Apidae. O grupo das abelhas corbiculadas é constituído 

também por outras três tribos: Apini e Meliponini, 

altamente sociais, e a tribo Bombini, que apresenta 

espécies primitivamente eusociais. O nome deste grupo deve-

se à presença das corbículas, estruturas presentes na tíbia 

posterior das fêmeas destas espécies e utilizadas para 

transporte do pólen nos vôos de forrageamento. 

 

                                                
1
 Pelo fato dos nomes terem as mesmas letras iniciais, as 

abreviações usadas para cada gênero serão Eg., Ef., El., Ex. e Ag. 
respectivamente. 
 



 

2 

 

 

Figura 1. Machos dos cinco gêneros de Euglossini. (a) Euglossa mixta. 
(b) Euglossa sp. com a probóscide extendida. (c) Eufriesea pulchra. 
(d) Eulaema meriana. (e) Exaerete frontalis. (f) Aglae caerulea. Fotos 
de E. Ross. Extraído de Cameron (2004). 

 

Os machos de Euglossini são, em alguns casos, os 

únicos polinizadores de algumas espécies de orquídeas. Eles 

são atraídos por fragrâncias produzidas nas flores destas 

espécies, coletando estas essências e armazenando-as em 

estruturas especiais localizadas no terceiro par de pernas. 

Somente no final da década de 60, os estudos sobre a 

biologia e taxonomia do grupo tiveram um grande avanço, 

graças aos estudos utilizando compostos químicos atrativos, 

sintetizados em laboratório. 

As fêmeas do grupo, no entanto, não são atraídas por 

estes compostos, o que faz com que a maioria dos trabalhos 

realizados baseiem-se na observação de machos. Atualmente, 

alguns trabalhos utilizando ninhos-armadilha (Garófalo et 

al. 1998; Garófalo & Rozen 2001; Cameron & Ramirez 2001) e 



 

3 

 

marcação-captura durante forrageamento (López-Uribe & Del 

Lama 2007; López-Uribe et al. 2008) têm contribuído com 

algum conhecimento sobre a biologia das fêmeas.  

Além das orquídeas, os euglossíneos utilizam-se de 

recursos de outros grupos vegetais como Lecythidaceae 

(Knudsen & Mori 1996), Euphorbiaceae (Armbruster et al. 

1992) e Solanaceae (Soares et al. 1989), entre outras 

famílias de Angiospermas, o que faz com que estas abelhas 

sejam consideradas “espécies-chave” de muitos ecossistemas 

devido ao seu papel como polinizadores.  

 

1.2. Origem da tribo Euglossini 

A relação entre Euglossini e as demais tribos de 

corbiculados ainda é incerta. A análise de caracteres 

morfológicos (Roig-Alsina & Michener 1993; Schultz et al. 

1999) e a incorporação de informações relativas a espécimes 

fósseis (Engel 1999) têm posicionado Euglossini como tribo 

basal do restante do grupo. 

Por outro lado, o estudo de Lockhart & Cameron (2001), 

analisando caracteres morfológicos relevantes de abelhas de 

língua longa, mostrou um suporte semelhante ao descrito por 

Michener (1974), com Euglossini como grupo irmão de Bombini 

e Apini de Meliponini. Estes resultados diferem dos achados 

oriundos de estudos moleculares, que apontam Euglossini e 

Apini como um clado monofilético (Koulianos et al. 1999; 

Cameron 1993), uma indicação de que há incerteza no 

enraizamento da filogenia quando se considera apenas dados 

morfológicos.  

Resultados genéticos mais recentes (Cameron & Mardulyn 

2001) mostram um forte suporte para o clado (Bombini + 

Meliponini), com incertezas a respeito da posição de 

Euglossini como grupo-irmão de Apini ou de (Bombini + 

Meliponini) (Figura 2). 

Dentre os corbiculados, a tribo Euglossini é a única 

que não apresenta comportamento eusocial e, por esta razão, 



 

4 

 

tem sido objeto de estudos sobre a origem da socialidade 

nas abelhas. A maioria dos euglossíneos é solitária, exceto 

por algumas espécies de Euglossa e Eulaema que apresentam 

comportamento de nidificação comunal (Dodson 1966; Zucchi 

et al. 1969; Garófalo 1985; Garófalo et al. 1998; Roberts & 

Dodson, 1967). 

Não se sabe ao certo se este comportamento de 

nidificação comunal em Euglossini é primitivo ou derivado, 

pois ainda há incertezas quanto à filogenia da tribo.  

 

 

 

 

1.3. Relações filogenéticas dentro da tribo Euglossini 

Nos últimos 20 anos, cinco hipóteses de relações 

filogenéticas entre os gêneros foram propostas (Figura 3). 

 
Figura 2. Relações filogenéticas do grupo de abelhas corbiculadas, 
estabelecidas a partir dos genes Citocromo B, 16S, 28S e opsina, usando 
grupos externos. O asterisco ao lado do nome da tribo indica que, para 
aquela filogenia, esta tribo não demonstrou ser monofilética. Extraído 
de Cameron & Mardulyn (2001). 
 



 

5 

 

Destas, as quatro primeiras (a - d) são baseadas em um 

pequeno número de caracteres morfológicos (Kymsey 1982, 

1987; Michener 1990; Engel 1999).  

A hipótese mais recente (e) é suportada por dados 

moleculares de quatro genes (Michel-Salzat et al. 2004), 

que demonstraram um resultado congruente ao relatado por 

Oliveira (2000), com base em um número consideravelmente 

maior de caracteres morfológicos do que os utilizados em 

estudos anteriores (Figura 3-e).  

 

 

 

Apesar da dificuldade em se estabelecer a história 

evolutiva da tribo, a natureza monofilética de cada gênero 

parece ser inquestionável (Michel-Salzat et al. 2004). 

Figura 3. Relações filogenéticas entre os gêneros da tribo 
Euglossini. (a) Primeira e (b) Segunda filogenias propostas por 
Kimsey (1982, 1987) com base em caracteres morfológicos; (c) 
filogenia de Michener, também baseada em caracteres morfológicos; (d) 
filogenia de Engel (1999) com base na morfologia e dados de fósseis; 
(e) filogenia molecular baseada nas sequências de quatro genes 
reportadas por Michel-Salzat et al. (2004) e em dados morfológicos de 
Oliveira (2000). 



 

6 

 

Além disso, parece claro que o gênero Aglae é basal e 

que os gêneros Eufriesea e Eulaema formam um grupo-irmão. A 

maior controvérsia parece residir no possível clado irmão 

de (Eufriesea + Eulaema), ora considerando-se o grupo 

(Exaerete + Euglossa) constitutivo de um clado, ora 

considerando Exaerete ou Euglossa, sem monofilia entre 

estes dois gêneros (sendo estes dois últimos 

parafiléticos). 

 

1.4. Caracterização do gênero Exaerete 

O gênero Exaerete é composto por abelhas que variam 

entre 18 e 28 mm, de cores verde, verde-azulado ou ainda 

púrpura metálicos. Este gênero, ao contrário de Aglae, 

monoespecífico e de distribuição restrita à Amazônia (mas 

recentemente encontrada no Pantanal – ver Anjos-Silva et 

al. 2006), é composto atualmente por sete espécies, 

ocorrendo desde o norte da Argentina até o México. No 

Brasil, as espécies de Exaerete distribuem-se por quase 

todas as regiões fitogeográficas, desde a floresta 

Amazônica (dos estados do Acre ao Maranhão) a regiões de 

clima semi-decíduo e de Floresta Atlântica (dos Estados de 

São Paulo até o Rio Grande do Norte) (Moure 1967; Kimsey 

1979; Ramírez et al. 2002; Rebêlo & Garófalo 1997; Nemésio 

2009). 

A primeira hipótese filogenética para o gênero foi 

feita por Engel (1999) para as cinco espécies conhecidas à 

época. Este estudo corroborou a hipótese de monofilia do 

gênero, assim como confirmou os dois grupos taxonômicos 

internos já conhecidos: frontalis (Ex. smaragdina + Ex. 

frontalis), com palpos labiais bi-segmentados e presença do 

nódulo hipoepimeral, e dentata (Ex. dentata + Ex. 

trochanterica + Ex. azteca), com palpos labiais tetra-

segmentados e nódulo hipoepimeral ausente (Moure 1964; 

1967). 



 

7 

 

Em 2003, uma nova espécie, Ex. lepeletieri, foi 

descrita (Oliveira & Nemésio 2003). De distribuição 

restrita à bacia amazônica brasileira, ela se assemelha 

muito às espécies Ex. frontalis e Ex. smaragdina, o que 

levou à proposição de que a nova espécie fosse apenas o 

híbrido entre as duas espécies (Anjos-Silva et al. 2007).  

Posteriormente, uma nova espécie foi descrita, Ex. 

guaykuru (Anjos-Silva & Rebelo 2006), aparentemente mais 

aparentada a Ex. trochanterica, encontrada em florestas 

úmidas do Planalto dos Guimarães, sul do Mato Grosso, 

Brasil.  

Após a descrição destas duas novas espécies, uma nova 

análise filogenética para o gênero foi conduzida. Anjos-

Silva et al. (2007) identificaram três clados principais 

para o gênero (Figura 4). Além disso, os autores concluíram 

que Ex. lepeletieri era apenas uma variante regional de Ex. 

frontalis, sugerindo que estas eram espécies sinônimas. 

Recentemente, Nemésio (2009) reanalisando os 

caracteres morfológicos de Ex. lepeletieri, manteve o 

status de espécie anteriormente definido. No entanto, ainda 

não foi realizado estudo utilizando marcadores genéticos 

(genes mitocondriais, p.e.) para a confirmação do status de 

espécie de Ex. lepeletieri e Ex. guaykuru.  

O acesso à diversidade genética proporciona a 

capacidade de detecção de espécies crípticas, pois um 

estágio crítico para a especiação é o acúmulo de diferenças 

genéticas entre populações (Coyne 1992; Schluter 1996). 

 Esta ferramenta molecular não implica na eliminação 

da taxonomia descritiva tradicional (Dunn 2003; Lipscomb et 

al. 2003; Seberg et al. 2003) que, graças a grandes avanços 

teóricos, aumentou sua capacidade de predição e 

determinação do status de espécie. Porém, análises 

filogenéticas aumentam essa capacidade de predição, pois os 

indivíduos de uma determinada espécie devem coalescer em um 



 

8 

 

ancestral comum formando sempre um clado monofilético (Baum 

& Shaw 1995). 

Na sistemática filogenética, marcadores de DNA 

mitocondrial têm se mostrado os marcadores mais apropriados 

para a caracterização de espécies.  Sua taxa evolutiva 

chega a ser 10 vezes mais rápida do que a de genes 

nucleares (Vawter & Brown 1986), possui baixas taxas de 

recombinação (Avise 2004) e herança exclusivamente materna. 

Estas características resultam em uma maior resolução de 

padrões intra-específicos do que métodos não moleculares 

(Avise 2000). 

 

 
Figura 4. Relações filogenéticas das espécies de Exaerete. Retirada de 
Anjos-Silva et al. (2007). Pontos pretos indicam mudanças únicas e não 
ambíguas, pontos brancos indicam reversões e convergências. 

 

 

1.5. Origem do cleptoparasitismo em Euglossini 

Se a reconstrução filogenética mais aceita para 

Euglossini for suficientemente robusta, dela resultará que 

nenhum dos dois gêneros cleptoparasitas evoluíram este 

comportamento diretamente sobre os gêneros hospedeiros 

atuais, por terem origem anterior aos seus hospedeiros.  

Esta seria uma contradição à regra de Emery (discutida em 

Wilson 1971) que prevê que cleptoparasitas evoluem de 

táxons intimamente relacionados que tornar-se-ão seus 

hospedeiros. 



 

9 

 

Nas espécies dos gêneros Aglae e Exaerete, as fêmeas 

perderam as estruturas carregadoras de pólem, exibem uma 

quantidade reduzida de pelos e uma fina cutícula, também 

encontrada em outras espécies de abelhas parasitas. 

Mesmo sendo o gênero Aglae o mais ancestral do grupo, 

o cenário mais provável é o de que este comportamento tenha 

surgido duas vezes dentro da tribo a partir de um ancestral 

já extinto não cleptoparasita. Deve-se lembrar que tal 

comportamento tem várias origens independentes dentro de 

grupo Apinae (Michener 2000). 

Além disso, os euglossíneos parasitados não aparentam 

ter evoluído algum comportamento efetivo de defesa para 

combater o parasitismo. É notável que ninhos de Eulaema 

cheguem a ter altas taxas de parasitismo por Exaerete, 

variando entre 70 a 100% (Garófalo & Rozen 2001; Zucchi et 

al. 1969). 

Pouco se sabe sobre a biologia e o comportamento 

parasítico das espécies do gênero Exaerete. No entanto, há 

relatos na literatura de ninhos de Eufriesea (surinamensis 

e auriceps) atacados por Ex. dentata (Benett 1972; Kimsey 

1982), El. nigrita atacados por Ex. smaragdina (Garófalo & 

Rozen 2001) e El. meriana e El. flavenscens por Ex. 

frontalis (Kimsey 1979). 

O sucesso do parasitismo parece ser dependente de 

densidade. Desta forma, espera-se que os parasitas sejam 

raros ou ausentes em locais em que os hospedeiros não são 

residentes (Weislo 1987 in Nemésio & Silveira 2006). 

Em concordância com tal pressuposto, Nemésio & 

Silveira (2006) testaram a hipótese de associações 

parasíticas entre Ex. frontalis – El. meriana e Ex. 

smaragdina – El. nigrita, analisando inventários de coletas 

realizadas nas Américas do Sul e Central. Para tanto, 

apenas dados de freqüência e latitude foram utilizados. 

 

 



 

10 

 

 

Figura 5. Células de Eulaema nigrita sendo aprovisionadas (a, b) e 
parasitada (c) por Exaerete smaragdina. A seta (d) indica a marca 
deixada pelo orifício aberto para a oviposição por Exaerete 
smaragdina. Extraído de Garófalo & Rozen (2001). 

 

Os autores observaram que há uma fraca associação 

entre Ex. smaragdina e El. nigrita, tendo esta última 

espécie uma distribuição maior em direção ao sul. Além 

disso, estudos recentes indicam que El. nigrita evita o 

interior de florestas bem conservadas (Nemésio 2004), sendo 

muito freqüentes em ambiente perturbados, como os ambientes 

urbanos (López-Uribe et al. 2008). Estes dados parecem 

corroborar a hipótese de que quanto maior a latitude, mais 

difícil para Ex. smaragdina parasitar seu hospedeiro.  

Desta forma, possivelmente El. nigrita não seja o 

único hospedeiro de Ex. smaragdina. Porém, não há até a 

presente data relatos de ataques deste cleptoparasita a 

ninhos de outra espécie.  

Neste contexto, o estudo de filogeografia comparada de 

espécies filogeneticamente ou ecologicamente associadas 

pode prover uma ferramenta interessante para identificar e 

avaliar os efeitos de fatores ecológicos, históricos ou 

estocásticos nos padrões de distribuição biogeográficos, 

como é o caso da relação existente entre Ex. smaragdina e 

El. nigrita. 

O objetivo da filogeografia é caracterizar a 

distribuição filogeográfica de linhagens genealógicas 



 

11 

 

através da paisagem geográfica (Avise et al. 1987), 

detectando processos como subdivisão populacional, eventos 

de especiação ou adaptação ecológica e rotas de migração 

associadas com mudanças climáticas passadas (Avise 2000). 

A filogeografia comparada é definida como a comparação 

de padrões geográficos de subdivisão evolutiva entre 

espécies co-distribuídas ou complexos de espécies, 

compartilhando uma rede conceitual comum à biogeografia 

histórica (Zink 1996). A filogeografia comparada permite, 

portanto, a investigação de questões biogeográficas em 

escalas temporais e espaciais menores do que aquelas 

usualmente estudadas com outros métodos (Avise 2000) e 

freqüentemente revela eventos crípticos de vicariância nos 

biotas (Riddle et al. 2000). 

Padrões filogeográficos concordantes entre taxa 

distantes têm sido reportados (Sullivan et al. 2000; Hugall 

et al. 2002). Porém, há também relatos de que esta 

concordância não é regra geral e incongruências têm sido 

reportadas tanto em plantas quanto em animais (ver revisão 

em Arbogast & Kenagy 2001). Esta situação é particularmente 

evidente na Europa, o que sugere que cada táxon pode ter 

reagido independentemente aos eventos de glaciação do 

Quaternário (Hewitt 2000). 

Por outro lado, estudos de filogeografia comparada em 

espécies altamente associadas, como em casos de 

parasitismo, têm revelado que o grau de congruência 

filogenética aumenta com a obrigatoriedade da relação de 

dependência do parasita-hospedeiro. Conseqüentemente, em um 

nível intra-específico, pode-se assumir que os padrões 

filogeográficos observados entre espécies associadas ou uma 

relação parasítica são comumente congruentes no tempo e no 

espaço, desde que o parasita seja específico e obrigatório 

(Price 1980). 

A utilização de métodos de coalescência e máxima 

verossimilhança (Wakeley 2003; Beerli & Felsenstein 1999) 



 

12 

 

ou a análise de clados aninhados (Templeton 1998) permitem 

a interpretação de padrões filogeográficos dentro de um 

contexto de modelos evolutivos e biogeográficos. Como 

resultado, a filogeografia tem se constituído em método 

adequado para a investigação de questões atinentes à 

biogeografia, incluindo os efeitos relativos de forças como 

deriva genética, gargalos e expansões populacionais e 

eventos de vicariância na modelagem de padrões geográficos 

da variação genética. 

Desta forma, a utilização da filogeografia comparada 

parece ser o meio adequado para investigar a possível 

associação entre a história evolutiva de Ex. smaragdina e 

El. nigrita. 



 

13 

 

2. OBJETIVOS 

A especiação pode envolver aspectos biológicos como 

divergências na escolha de habitats ou no comportamento 

sexual dos machos (Willians 1982), ou ainda seleção natural 

em resposta à competição parasita-hospedeiro. O número de 

espécies descritas de Euglossíneos tem aumentado a cada 

ano, inclusive para gêneros pouco diversos como Exaerete, 

que teve duas novas espécies descritas recentemente 

(Oliveira & Nemésio 2003; Anjos-Silva & Rebelo 2006), não 

existindo até o momento uma análise filogenética baseada em 

marcadores moleculares para este gênero. 

Ainda para este grupo, os dados da literatura indicam 

que suas populações são geralmente reduzidas, com um 

aumento na abundância destes cleptoparasitas em direção ao 

Equador. Não há informações na literatura a respeito dos 

padrões filogeográficos de suas espécies mais abundantes 

(Ex. smaragdina e Ex. frontalis), ainda que elas apresentem 

uma grande área de distribuição (desde a América Central 

até a região sudeste do Brasil). O fato de suas populações 

serem aparentemente de tamanho reduzido e estarem dispersas 

por vários domínios fitogeográficos contribuiria para a sua 

divergência genética.  

Além disso, pelo fato das espécies do gênero Exaerete 

parasitarem ninhos de outras espécies de Euglossini, como 

de Eulaema nigrita (Garófalo & Rozen 2001), Eulaema meriana 

(Nemésio & Silveira 2006) e Eufriesea surinamensis (Bennett 

1972), um estudo de filogeografia comparada pode indicar 

padrões evolutivos similares, já que pode estar havendo 

coevolução entre parasita e hospedeiro. 

Desta forma, o estudo filogenético e filogeográfico de 

espécies-chave dentro do grupo Euglossini, como espécies 

cleptoparasitas e seus hospedeiros, poderá contribuir para 

esclarecer questões ecológicas e evolutivas desta tribo, 

identificando padrões históricos de colonização, 

identificar respostas evolutivas a mudanças de habitat e a 



 

14 

 

pressões de seleção como predação e avaliar os contextos 

geográficos e ecológicos de espécies dentro de comunidades 

mais complexas, determinando os padrões de riqueza de 

espécies (Ricklefs & Schluter 1993). 

Assim, este trabalho tem dois objetivos: 

1 – Estabelecer e comparar os padrões filogeográficos 

de Ex. smaragdina e de sua espécie-hospedeira El. nigrita a 

partir de indivíduos coletados em diferentes domínios 

fitogeográficos (Mata Atlântica, Cerrado, Pantanal e 

Floresta Amazônica), com vistas a traçar as possíveis rotas 

evolutivas biogeográficas de cada espécie e compará-las, a 

fim de testar se os padrões são ou não concordantes; 

2 – Confirmar o status de espécie de Ex. lepeletieri 

e sua relação com o grupo frontalis mediante análises da 

taxonomia molecular. 

 

 



 

15 

 

3. MATERIAL E MÉTODOS 

3.1. Material 

O material analisado consistiu de 37 indivíduos de 

Exaerete smaragdina e 34 indivíduos de Eulaema nigrita de 

diversas localidades do Brasil, conforme descrito na Tabela 

1 e Figura 6. Para a confirmação do status de espécie de 

Exaerete lepeletieri foram analisados seis exemplares 

descritos como sendo desta espécie, outros seis de Exaerete 

frontalis, além dos espécimes de Ex. smaragdina já 

referidos na Tabela 1.  

Os espécimes analisados eram todos machos coletados em 

iscas-odor e enviados ao nosso laboratório em álcool ou 

secos. Apenas os exemplares de São Carlos e Rifaina foram 

coletados em ninhos de El. nigrita e mantidos a -20ºC até o 

momento da extração.  

 

3.2. Extração de DNA e amplificação 

Foi extraído o DNA total de uma perna de cada 

indivíduo. O método utilizado foi o de fenol/clorofórmio 

proposto por Sheppard & McPheron (1991), com a adição de um 

passo adicional de incubação do macerado por uma hora a 

65ºC na presença de 10µL de proteinase K (10mg/ml). 

Foram amplificados via reação em cadeia da polimerase 

(PCR) os locos 16S, Citocromo B (CytB) e Citocromo Oxidase 

I (COI), utilizando-se os oligonucleotídeos iniciadores 

descritos na Tabela 2. 

 

 

 

 

 

 

 



 

16 

 

 

 

Tabela 1. Localidades amostradas no presente estudo, seguidas da 
sigla do estado e da região geográfica, quando referentes ao Brasil, 
ou pelo nome do país quando não. As amostras de outros países, com 
exceção de Villavencio (CO), foram extraídas do trabalho de Dick et 
al. (2004). O código refere-se à abreviatura utilizada no mapa (Figura 
6), onde as localidades estão designadas segundo sua latitude e 
longitude. Para cada localidade está representado o número de 
indivíduos analisados para cada loco e espécie. 

 

     Ex. smaragdina El.  nigrita 

Localidade Região Código Latitude Longitude 16S CytB COI CytB COI 

Ubatuba - SP SE UB 23°31'47"S 45°04'42"O 3 2 1 3 2 

São Carlos - SP SE SC 21°59'04"S 47°52'43"O 5 4 2 3 3 

Rifaina - SP SE RF 20°04'55"S 7°25'27"O 5 4 3 2 2 

Guarapari - ES SE GR 20°39'03"S 40°30'24"O    4 2 

Viçosa - MG SE VC 20°45'16"S 2°52'57"O    3 2 

Marliéria - MG SE MR 9°42'47"S 42°43'57"O    3 3 

Cáceres - MT CO CC 16°04'28"S 7°39'35"O 2 2  3 1 

C. Guimarães - MS CO CG 15°27'10"S 55°44'21"O    2  

Pontes e Lacerda - MT CO PL 15°14'31"S 59°18'56"O 3 3 1   

Cristalino - MT CO CR 9°52'09"S 56°05'37"O 2 2 1 2  

João Pessoa - PB NE JP 7°08'39"S 34°51'34"O 5 5 3 3 2 

Barreirinha - MA N BR 4°14'03"S 44°14'00"O 1 1    

Candido Mendes - MA N CM 1°51'37"S 45°46'10"O 1 1    

Campina - AM N CP 8°39'36"S 64°21'57"O 1     

Borba - AM N BB 5°15'09"S 58°41'52"O 2 1    

Manaus - AM N MN 3°06'01"S 59°58'36"O 5 5 3 3 2 

Caju - AM N CJ 0°48'10"S 62°29'07"O 1 1    

Serrinha - AM N SR 0°25'09"N 63°23'00"O 1 1    

Villavencio Colômbia VV 4°09'26"N 73°38'14"O    3 2 

TOTAL     37 32 14 34 21 

Ixiamas Bolívia IX 13°45'26"S 68°08'40"O   1  1 

Buena Vista Bolívia BV 11°32'41"S 68°27'50"O   1   

Yasuní Equador YS 0°09'34"S 78°28'54"O   1   

Kourou G. Franc. KR 5°09'55"N 52°38'39"O     2 

Montagne Tortue G. Franc. MT 5°10'60"N 52°58'00"O   2   

Las Perlas Panamá LP 8°56'49"N 79°33'38"O   3   

Barro Colorado Panamá BC 9°09'17"N 79°50'53"O     2 

Chetumal México CH 18°30'13"N 88°18'19"O   1   

TOTAL       9  5 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 



 

17 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 
 
 
 
Figura 6. Mapa com as localidades amostradas neste trabalho. Os 

códigos referem-se ao nome de cada localidade, referidas na Tabela 1.  

 

As reações de amplificação foram preparadas em volume 

final de 25µL contendo 250µM de cada dNTP, 5mM de MgCl2 

para os locos 16S e COI e 2,5mM para o loco CytB, 1µM de 

cada primer (F e R), tampão 1x, 1U de Taq DNA polimerase 

(Platinum – Invitrogen) e 1µL de solução de DNA (40-70 ng).  

As condições de PCR utilizadas foram:  

∗ 16S: 1 ciclo de 94oC por 3 min, seguido de 35 

ciclos de 94oC por 20s, 52oC por 20s e 72oC por 1 min.  

∗ CytB: 35 ciclos de 94 oC por 30s, 56 oC por 20s e 

72 oC por 1 min.  

∗ COI: 4 ciclos de 94o por 30s, 48o por 30s e 72o 

por 1min, seguido de 35 ciclos de 94o por 30s,52o por 

30s e 72o por 45s. 



 

18 

 

 

 Para a verificação do resultado da amplificação, os 

fragmentos foram visualizados em géis de agarose a 1%. 

 

Tabela 2. Primers utilizados para amplificação por PCR dos locos 
analisados neste trabalho e seus respectivos autores.  

Loco Foward Autor Reverse Autor 

16S 874-16S Cameron et al. 1992 16SWb Dowton & Austin 1994 

CytB CR091A Crozier et al. 1991 CR091B Crozier et al. 1991 

COI COI-F Dick et al. 2004 COI-R Dick et al. 2004 

 

  

 

3.3. Seqüênciamento do DNA mitocondrial. 

 Os produtos de amplificação foram purificados 

utilizando 1U de SAP (Shrimp Alkaline Phosphatase, GE) e 

10U de ExoI (Exonuclease I, GE) para cada 8µL de produto de 

PCR. A mistura foi incubada a 37oC por 1 hora a 80oC por 15 

minutos.  

A reação de seqüenciamento foi feita com 2µL de 

Dyenamic ET Dye premix (GE Healthcare), 10pmoles de cada 

primer, aproximadamente 50ng de DNA e água para completar 

10µL de volume final. As seqüências forward e reverse foram 

obtidas em seqüenciador automático MegaBace 750-GE e os 

eletroferogramas analisados no programa CodonCode Aligner 

versão 1.6.3 (CodonCode, Dedham, Massachusetts, United 

States). Após correção, as seqüências foram alinhadas pelo 

programa Clustal X (Thomson et al. 1997), disponível no 

software BioEdit versão  7.0.5 (Hall 1999).  

 

 

  

3.4. Análises populacionais 

Seqüências com, pelo menos, um sítio polimórfico foram 

consideradas um haplótipo diferente. Foram estimados os 

seguintes parâmetros genéticos: composição nucleotídica, 



 

19 

 

diversidade nucleotídica (Nei 1987), diversidade 

haplotípica (Nei 1987) e número médio de variações, 

implementados no programa Arlequin 3.0 (Excoffier et al., 

2005).  

Com o mesmo software, foram efetuados também os testes 

de neutralidade D de Tajima (Tajima 1989) e Fs de Fu (Fu 

1996) para as duas espécies e para os locos analisados. 

Estes testes examinam se há desvios significantes do 

equilíbrio genético para o DNA mitocondrial, os quais podem 

indicar eventos populacionais em situações onde não ocorrem 

vantagens seletivas entre os haplótipos, ou seleção 

positiva e purificadora (Simonsen et al. 1995) quando há 

diferenças adaptativas entre os alelos. 

Para efeitos como expansão populacional, tem sido 

sugerido o uso de testes como o teste D de Tajima e o teste 

Fs de Fu, por serem mais sensíveis a este tipo de evento 

(Fu 1997). O teste de Tajima compara o número de sítios 

segregantes com a diversidade nucleotídica, enquanto o 

teste de Fu leva em conta a polaridade das mutações (isto 

é, qual o possível haplótipo ancestral e o seu derivado), e 

estima θ baseado no número de mutações únicas derivadas 

(singletons). 

Análises de estruturação e subdivisão das populações 

foram estimadas por Fst par-a-par entre as populações 

(Cockerham & Weir 1993) e de variância molecular (AMOVA) 

(Excoffier et al. 1992) entre as 4 regiões amostradas 

(Sudeste, Nordeste, Amazônia e Pantanal). A AMOVA estima a 

partição da variância em diferentes níveis de estruturação 

populacional, por meio de estatística phi (Φ): ΦCT sendo 

uma medida de diferenciação entre as regiões, ΦSC de sub-

estruturação dentro das regiões e ΦST uma medida de 

diferenciação entre as populações depois de verificada a 

diferenciação entre as regiões. A significância dos 

componentes de variância foi medida empiricamente 



 

20 

 

(Excoffier et al. 1992), conforme implementado no programa 

Arlequin 3.0 (Excoffier et al. 2005).  

 

 

3.5. Análises filogeográficas 

Para as análises filogeográficas do loco COI, as 

seqüências descritas por Dick et al. (2004) para as 

espécies Ex. smaragdina (Nos de acesso: AY506470-78) e El. 

nigrita (Nos de acesso: AY506452-56) foram utilizadas. 

Para cada loco seqüenciado foi realizada uma análise 

filogenética pelo método de Neighbour-Joining, segundo o 

modelo de máxima verossimilhança composta, com 5.000 re-

amostragens. Dada a baixa variabilidade encontrada entre os 

indivíduos, os locos foram concatenados (16S, CytB e COI 

para Ex. smaragdina e CytB e COI para El. nigrita), e uma 

nova análise filogenética foi realizada. 

A utilização de seqüências concatenadas é sugerida, 

entre outros, por Gadagkar et al. (2005). Segundos estes 

autores, a união de seqüências de um segundo gene aumenta 

substancialmente a acurácia de inferências filogenéticas, 

mesmo quando não é feita uma aproximação dos padrões de 

substituição gene-específica na inferência. A utilização de 

genes mitocondriais apresenta ainda a vantagem de não 

ocorrer recombinação gênica, diferentemente dos genes 

nucleares. 

Foram feitas redes de haplótipos baseadas no método de 

parcimônia estatística (Templeton 1995; 2002) através do 

software TCS (versão 1.13 – Clemente et al. 2000). Este 

método provê uma estimativa do número máximo de diferenças 

entre haplótipos como resultado de substituições simples 

com uma confiabilidade estatística de 95% (Posada & 

Crandall 2001). As redes foram, então, aninhadas 

manualmente seguindo as regras propostas por Templeton & 

Sing (1993). 

 



 

21 

 

 

3.6. Análises filogenéticas de Ex. lepeletieri 

Para a confirmação do status de espécie de Exaerete 

lepeletieri foram analisados os locos 16S e CytB. Foram 

realizadas análises de diversidade nucleotídica (Nei 1987) 

entre os indivíduos da mesma espécie e entre as espécies. 

Além disso, foi feita a análise de Fst par-a-par (Cockerham 

& Weir 1993) entre as espécies.  

A análise filogenética foi feita pelo método de 

Neighbour-Joining, seguindo o modelo de máxima 

verossimilhança composta, com 5.000 re-amostragens.  



 

22 

 

 

4. RESULTADOS E DISCUSSÃO 

Devido ao longo tempo de estocagem de algumas das 

amostras, a qualidade do DNA extraído e das reações de 

amplificação não foi homogênea. Alguns dos exemplares não 

apresentaram bom rendimento nas reações de amplificação e, 

conseqüentemente, de seqüenciamento, seja para um loco em 

particular, seja para todos. Neste último caso, o espécime 

não foi sequer considerado na amostragem, de forma a evitar 

resultados espúrios que prejudicariam a consistência das 

conclusões finais do presente estudo. 

De forma a organizar a apresentação dos resultados, 

estes serão relatados na seguinte seqüência: estimativas de 

diversidade genética das populações de Ex. smaragdina, a 

filogeografia e a estruturação genética de suas populações. 

Após, seguem as mesmas análises para a espécie Eulaema 

nigrita e a comparação dos padrões observados entre as duas 

espécies. Por fim, é feita a análise filogenética para a 

confirmação do status de espécie de Exaerete lepeletieri. 

 

4.1. Diversidade genética das populações de Exaerete 

smaragdina 

A composição nucleotídica dos locos de Ex. smaragdina 

mostrou-se similar à reportada para o DNA mitocondrial de 

outras espécies de abelhas corbiculadas, com uma elevada 

proporção de adenina-timina e baixo conteúdo de citosina- 

guanina (Tabela 3). 

A diversidade nucleotídica observada para Ex. 

smaragdina foi de 0,31% para o loco 16S e 0,48% para CytB, 

(Tabela 4). Estes valores são próximos aos verificados em 

outros estudos filogeográficos de insetos da América do 

Sul, variáveis entre 0,37% e 0,65% (Brito et al. 2002; 

Scarpassa et al. 2008, respectivamente). Estes valores 

aumentaram quando amostras de outros países da América do 

Sul e Central, analisadas por Dick et al. (2004), foram 



 

23 

 

adicionadas à análise. Para esta amostragem, foram 

observados 10 haplótipos e uma diversidade nucleotídica de 

0,84%, maiores do que os observados para os outros dois 

locos analisados.  

 

Tabela 3. Composição nucleotídica dos locos 16s, Citocromo B e COI 
para Exaerete smaragdina. 

Loco A T C G 

16S 39,52% 41,57% 11,99% 6,92% 

CytB 34,25% 46,47% 11,40% 7,88% 

COI 32,89% 42.72% 9.48% 14.91 

 

Os testes de neutralidade D de Tajima (Tajima 1989) e 

Fs de Fu (Fu 1996) não tiveram suporte estatístico (p > 

0,05), exceto para a estatística D para o loco 16S (Tabela 

5). Segundo Simonsen et al. (1995), o teste D de Tajima tem 

bom poder de detectar eventos demográficos como 

estruturação populacional, enquanto o teste Fs de Fu 

demonstra ser mais sensível a eventos como expansão 

populacional recente. Estas considerações quanto à natureza 

de cada teste podem ser uma explicação para a significância 

do teste D (estruturação) e não significância do teste Fs 

(ausência de alelos raros – expansão recente) para o loco 

16S. 

 

Tabela 4. Índices de diversidade gênica (variância) para os locos 
analisados em Exaerete smaragdina. 

Loco 
Nº de 

haplótipos 
Diversidade 
haplotípica 

Diversidade 
nucleotídica 

Nº médio de 
variações 

16S 5 0.664 (0.046) 0.003 (0.002) 1.426 (0.891) 

Cyt.B 6 0.662 (0.053) 0.005 (0.003) 1.763 (1.051) 

COI 10 0.840 (0.056) 0.008 (0.005) 3.540 (1.863) 

 

Os testes de neutralidade para Exaerete smaragdina 

suportam, portanto, a hipótese de evolução neutra para as 

populações desta espécie, indicando não ter havido nenhum 

grande evento de expansão ou retração demográfica recente 

para a espécie.   

 



 

24 

 

 

Tabela 5. Valores obtidos para os testes de neutralidade de Tajima (D) 
e Fu (Fs) e os respectivos valores de P (entre parênteses) para os 
três locos analisados de Exaerete smaragdina. 

Loco D de Tajima Fs de Fu 

16S -1.950 (0.01) 0.574 (0.65) 

Cyt.B 0.493 (0.72) 0.065 (0.55) 

COI -0.157 (0.51) -1.344 (0.28) 

 

 

4.2. Estrutura genética e filogeografia das populações 

de Exaerete smaragdina 

A análise filogenética feita a partir dos locos 

individualmente demonstrou baixa resolução, devido ao baixo 

número de sítios polimórficos, conseqüência do curto tempo 

de divergência esperado dentro de uma espécie (Figura 7).  

No entanto, o loco 16S evidenciou a formação de dois 

grupos que podem estar fortemente associados à origem 

geográfica dos espécimes. O primeiro cluster reúne as 

amostras provenientes de João Pessoa (PB), aparentemente 

mais relacionadas às amostras do Norte e Centro-Oeste do 

Brasil. Estas últimas, no entanto, apresentam uma formação 

polifilética. O outro cluster reúne as amostras oriundas do 

Estado de São Paulo, com exceção de uma única amostra do 

Maranhão (Barreirinha). 

Por outro lado, o loco citocromo B não possui resolução 

suficiente para formação dos dois clados citados, mas sim 

para agrupar as amostras do Norte e Centro-Oeste, com 

exceção novamente da amostra de Barreirinhas e uma amostra 

de Manaus. 

Dentre os três locos, COI foi o mais informativo, dada 

a inclusão das seqüências de Dick et al. (2004). Um dado 

interessante a se destacar é a formação de um clado irmão 

às amostras de São Paulo e da Paraíba, formado pelas 

amostras do México e Panamá. Considerando a origem 

geográfica destas amostras, esperar-se-ia que elas 

estivessem mais intimamente relacionadas às amostras da 

Amazônia ou Equador. Infelizmente, não há dados na 



 

25 

 

literatura para amostras da América Central referentes aos 

locos 16S e CytB. 

Para as amostras aqui analisadas, a junção das três 

seqüências gênicas em uma única seqüência composta de 

1246pb evidenciou uma maior estruturação populacional, com 

a formação de três grupos bem definidos: São Paulo e 

Paraíba, mais próximos entre si, o que pode indicar uma 

possível rota evolutiva da espécie pela Mata Atlântica e um 

outro clado formado por Amazônia + Centro-Oeste, novamente 

duas regiões que podem compartilhar a mesma rota evolutiva 

(Figura 8). 

As redes de haplótipos para os locos 16S e CytB, dado o 

baixo número de sítios mutacionais que cada loco 

apresentou, não trouxe nenhuma informação além das 

observadas pelas reconstruções filogenéticas, ou seja, 

grupos regionais bem delimitados, mas incertezas na 

conectividade entre um grupo e outro (dados não 

apresentados).    

Para o loco COI, dado o maior número de amostras, foi 

possível observar a formação de seis grupos (1-1 a 1-6), 

inseridos em três grupos maiores (2-1 a 2-3) (Figura 9). 

Destes, o grupo 1-4 foi o único que uniu amostras de 

localidades separadas por grandes distâncias (Manaus, 

Bolívia, Guiana Francesa, Equador e Pantanal de Cáceres e 

Pontes e Lacerda). Os dados indicam que a região amazônica, 

em geral, apresenta uma homogeneidade muito grande, 

corroborando e ampliando o significado dos resultados de 

Dick et al. (2004). 

O grupo 2-1 foi caracterizado pelas amostras de 

localidades onde originalmente havia uma cobertura de Mata 

Atlântica (João Pessoa e localidades do estado de São 

Paulo), cada qual, no entanto, formando um subgrupo 

distinto, com polimorfismos particulares. Tal subdivisão 

pode ser um possível reflexo de isolamento por distância, 

ou ainda de um efeito de deriva dado o grande desmatamento 



 

26 

 

deste bioma. Uma amostragem em localidades intermediárias 

pode ajudar a aclarar os padrões observados.  

Esta disjunção filogenética entre a Mata Atlântica 

(Grupo 2-1) e os biomas Pantanal e Amazônia (Grupo 2-2) 

apresentam concordância com relatos da literatura para 

outros grupos de animais como insetos, pequenos mamíferos e 

morcegos (Costa 2002; Hoffmann & Baker 2003). 

 O aninhamento dos haplótipos de COI demonstrou ainda 

que as amostras do Panamá e do México (grupo 2-3 – Figura 

9) têm maior proximidade com as amostras da Mata Atlântica 

do que com a floresta amazônica, apesar da maior 

proximidade geográfica com este último grupo, corroborando 

a reconstrução filogenética.  

Sabe-se que algumas espécies colonizaram a América 

Central migrando ao redor da floresta amazônica, e não a 

atravessando. O caso mais bem estudado refere-se ao 

processo de africanização de Apis mellifera (Oliveira & 

Cunha 2005), porém, deve-se ponderar que esta é uma espécie 

exótica. Um estudo com mais amostras deve ser conduzido 

para uma verificação mais segura da rota de colonização de 

Ex. smaragdina em direção à América Central. 



 

27 

 

  

 J PESSOA 7591

 J PESSOA 7601

 J PESSOA 7894

 J PESSOA 7585

 J PESSOA 7590

 PON E LACERDA 9801

 CAND MENDES 10489

 CACERES 9791

 MANAUS 9232

 CACERES 9795

 BORBA 10491

 CAJU 10493

 SERRINHA 10488

 CRISTALINO 9793

 MANAUS 9233

 CRISTALINO 9792

 MANAUS 9235

 PON E LACERDA 9800

 BORBA 10490

 MANAUS 9229

 MANAUS 9234

 CAMPINA 10492

 RIFAINA 7642

 UBATUBA 10245

 UBATUBA 10244

 RIFAINA 7641

 S CARLOS 8030

 RIFAINA 7647

 UBATUBA 10243

 S CARLOS 8043

 S CARLOS 8029

 S CARLOS 8021

 S CARLOS 7982

 BARREIRINHA 10240

 RIFAINA 7640

 RIFAINA 7643

63

65

 

 J PESSOA 7590

 J PESSOA 7591

 RIFAINA 7642

 UBATUBA 10244

 S CARLOS 8029

 J PESSOA 7584

 S CARLOS 8030

 RIFAINA 7640

 S CARLOS 8043

 UBATUBA 10245

 BARREIRINHAS 10240

 S CARLOS 8021

 RIFAINA 7647

 J PESSOA 7585

 J PESSOA 7601

 RIFAINA 7641

 MANAUS 9229

 MANAUS 9235

 CRISTALINO 9792

 CAMPINA 10492

 PON E LACERDA 9801

 CRISTALINO 9793

 CAJU 10493

 MANAUS 9232

 MANAUS 9233

 BORBA 10490

 PON E LACERDA 9800

 CACERES 9791

 CACERES 9795

 CAND MENDES 10489

 MANAUS 9234

65

65

65

 MANAUS 9233

 CRISTALINO 9792

 MANAUS 9234

 MANAUS 9235

 BOLIVIA AY506470

 ECUADOR AY506478

 BOLIVIA AY506471

 CAJU 10493

 P E LACERDA 9800

 GUIANA FR AY506472

 GUIANA FR AY506473

 BORBA 10491

 BORBA 10490

 PANAMA AY506477

 PANAMA AY506475

 PANAMA AY506474

 MEXICO AY506476

 J PESSOA 7591

 J PESSOA 7590

 J PESSOA 7584

 UBATUBA 10244

 RIFAINA 7642

 SAO CARLOS 8021

 RIFAINA 7643

 SAO CARLOS 8030

84

60

78

73

71

55

 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Figura 7. Análise da reconstrução 
filogenética para a espécie 
Exaerete smaragdina. Acima: à 
esquerda, loco 16S, e à direita 
CytB. Ao lado loco COI. Análises 
feitas a partir do método de 
neighbour-joining, com 5000 
réplicas.  



 

28 

 

 

 

 S CARLOS 8021

 RIFAINA 7647

 S CARLOS 8030

 RIFAINA 7642

 UBATUBA 10244

 J PESSOA 7584

 J PESSOA 7590

 J PESSOA 7591

 BORBA 10490

 MANAUS 9235

 CAJU 10493

 MANAUS 9233

 PON E LACERDA 9800

 MANAUS 9234

 CRISTALINO 9792

65

94

75

86

95

65

 
Figura 8. Análise filogenética de Neighbour-Joining (5000 

réplicas) para os locos 16S, CytB e COI concatenados (1246pb) de 
Exaerete smaragdina. 
 
 

Para a confirmação dos resultados filogeográficos 

obtidos foram feitas análises de estatística F (Fst e 

AMOVA) entre as populações de cada localidade. Para tais 

análises, os resultados do loco COI foram desconsiderados. 

Este loco apresentou algumas dificuldades de 

seqüenciamento, e apenas uma ou duas amostras de cada 

localidade puderam ser seqüenciadas. Como o intuito das 

análises seguintes era analisar a estruturação 

populacional, e não o processo evolutivo da espécie (como 

na análise filogenética), optou-se por considerar apenas os 

locos 16S e CytB concatenados. 

 
 
 
 

 

 

 

 



 

29 

 

 

 

Figura 9. Análise de clados aninhados para o loco COI de Exaerete 
smaragdina. 

 

 

A AMOVA, estruturada entre as quatro regiões 

geográficas amostradas (Sudeste, Nordeste, Pantanal e 

Amazônia), confirmou a estrutura hierárquica ao nível de 

região, que demonstrou ser responsável por 76.35% da 

variação (ΦCT= 0.76351, p<0,01). O restante da variação 

(23,65%) ficou dividida entre as populações dentro de 

regiões (9.74%, com ΦSC= 0.41197 e p não significativo) e 

entre as populações (13.91%, com ΦST= 0.86094 e p< 0,0001) 

(Tabela 6). 

A análise do Fst par-a-par não evidenciou nenhum novo 

resultado, apenas confirmando a homogeneidade dentro das 

regiões, com a Amazônia e o Pantanal não significativamente 

diferentes entre si, e a heterogeneidade entre as demais 

(dados não apresentados).  

1-1 

1-5 

1-4 

1-3 

1-6 

1-2 

2-1 

2-3 

2-2 



 

30 

 

 

 

Tabela 6. Valores obtidos para a AMOVA a partir da concatenação dos 
locos 16S e CytB para Exaerete smaragdina. 
 

Tipo de variação 
Componentes 

da variação 

Porcentagem 

de variação 

Estatistica 

Phi 
P 

Entre grupos 1.2756 Va 76.35 ΦCT= 0.766 0.0059 

Entre populações 

dentro de grupos 
0.1628 Vb 9.74 ΦSC= 0.412 0.1007 

Entre populações 0.2323 Vc 13.91 ΦST= 0.861 <0,0001 

 

 

 

4.3. Diversidade genética das populações de Eulaema 

nigrita 

Por dificuldades técnicas ainda não identificadas, não 

foi possível obter seqüências confiáveis do loco 16S em El. 

nigrita, apesar do bom rendimento obtido nas reações de 

amplificação.    

A composição nucleotídica dos locos COI e CytB foram 

muito semelhantes às obtidas para Ex. smaragdina, como 

esperado, dada a proximidade filogenética entre as espécies 

(Tabela 7). 

 

 

Tabela 7. Composição nucleotídica dos locos Citocromo B e COI para 
Eulaema nigrita. 
 

Loco A T C G 

CytB 35.37% 47,07% 9,91% 7,66% 

COI 30,57% 44,94% 10,29% 14,20% 

 

 

Os índices de diversidade genética encontrados em 

Eulaema nigrita foram menores que os de Ex. smaragdina para 

ambos os locos (Tabela 8), mesmo com a adição de amostras 

de Viçosa, Marliéria, Guarapari e Villavencio, localidades 

não amostradas para Ex. smaragdina.  



 

31 

 

 
Tabela 8. Índices de diversidade gênica (variância) para os locos 
analisados em Exaerete smaragdina. 
 

Loco 
Nº de 

haplótipos 
Diversidade 
haplotípica 

Diversidade 
nucleotídica 

Nº médio de 
variações 

Cyt.B 5 0,377 (0,011) 0,002 (0,002) 0,920 (0,653) 

COI 7 0,597 (0,107) 0,003 (0,002) 1,033 (0,714) 

 

 

Quanto aos testes de neutralidade, tanto o teste de 

Tajima quanto o de Fu apresentaram valores negativos para o 

loco CytB, porém a significância destes testes ficou pouco 

acima do valor de corte de 5%. No entanto, para o loco COI, 

que apresenta uma taxa evolutiva maior do que CytB (Mueller 

2006) e, portanto, mais informativo, apresentou valores 

negativos e significativos para ambos os testes (Tabela 9). 

Se a violação da neutralidade observada for devida a 

eventos populacionais, como um gargalo genético ou expansão 

recente, ela deve afetar igualmente substituições sinônimas 

(dS) e não sinônimas (dNS). Tal fato pode ser observado em 

nossas amostras, não havendo desvios significativos de 

dNS/dS (P = 0.065 para CytB, e P = 0,204 para COI, teste Z 

de seleção com Ho dNS=dS segundo o modelo de substituição 

de Nei-Gojobori).  

 

 
Tabela 9. Valores obtidos para os testes de neutralidade de Tajima (D) 
e Fu (Fs) e seus respectivos valores de p para os dois locos 
analisados de Eulaema nigrita . 

 
Loco D de Tajima Fs de Fu 

Cyt.B -1.347 (P = 0.081) -0.746 (P = 0.067) 

COI -1.873 (P = 0.019) -3.037 (p = 0.008) 

 

 

A pequena amostragem para cada localidade pode 

influenciar os resultados, dado que existe uma tendência de 

se observar mais polimorfismos neste tipo de amostragem do 

que em grandes amostragens de uma única ou poucas 

localidades (Rand et al. 1994). Isso pode reduzir a 

capacidade de identificar as forças evolutivas atuantes, 



 

32 

 

pois alguns haplótipos podem ser comuns em algumas 

localidades em razão do pequeno número de indivíduos 

amostrados e que, portanto, aparecem eles mesmos como 

singletons, ou seja, únicos exemplares de seu haplótipo 

(Schmid et al. 1999). No entanto, pudemos evidenciar que o 

mesmo haplótipo está presente em praticamente todas as 

localidades amostradas (Figuras 12 e 13), mesmo distantes 

mais de 2.000 km entre si. Estes dados, apoiados no 

resultado do teste de AMOVA, a serem apresentados, 

evidenciam que existe uma homogeneidade significante em 

nossa amostragem (maior parte da variação compartilhada 

entre as populações), diminuindo a possibilidade de 

resultados espúrios dos testes de neutralidade. 

 

 

4.4. Estrutura genética e filogeografia das populações 

de Eulaema nigrita 

A baixa variabilidade genética encontrada em El. 

nigrita refletiu na reconstrução filogenética da espécie. 

Assim sendo, para o loco CytB, 26 dos 34 indivíduos 

analisados, distribuídos por toda área de amostragem 

apresentaram exatamente a mesma seqüência, com um cenário 

semelhante observado para o loco COI.  

Nos dois locos analisados, os poucos ramos formados não 

foram capazes de agrupar os indivíduos segundo sua origem 

biogeográfica, com exceção de um clado monofilético para as 

amostras de Villavencio (CO) considerando o loco CytB 

(Figura 10). Mesmo com os dois locos concatenados, formando 

uma única seqüência de 832pb, e uma diversidade haplotípica 

igual a 0,725, não foi possível uma reconstrução 

filogenética estatisticamente bem suportada (Figura 11). 

 

 



 

33 

 

 MARLIERIA 7499

 VILLAVENCIO 6191

 MARLIERIA 7500

 VILLAVENCIO 6193

 S CARLOS 6186

 VICOSA 7503

 6181 RIFAINA

 UBATUBA 10248

 VICOSA 7505

 S CARLOS 6187

 CACERES 9798

 BOLIVIA AY506455

 6180 RIFAINA

 PANAMA AY506452

 FRANCESA AY506453

 MANAUS 7816

 MANAUS 7818

 GUARAPARI 10221

 PANAMA AY506454

 GUARAPARI 10223

 J PESSOA 10226

 UBATUBA 10246

 J PESSOA 10228

 G FRANC AY506456

64

65

 

 J PESSOA 10228

 CRISTALINO 9810

 UBATUBA 10247

 J PESSOA 10227

 VICOSA 7503

 CACERES 9797

 GUARAPARI 10221

 RIFAINA 7494

 GUARAPARI 10224

 GUARAPARI 10222

 UBATUBA 10248

 CACERES 9796

 MANAUS 7816

 MANAUS 7817

 S CARLOS 6187

 CHAP GUIMARAES 9812

 S CARLOS 8031

 MARLIERIA 7499

 CACERES 9798

 RIFAINA 6181

 UBATUBA 10246

 VICOSA 7504

 J PESSOA 10226

 GUARAPARI 10223

 CRISTALINO 9794

 MARLIERIA 7498

 VILLAVENCIO 6193

 VILLAVENCIO 6191

 VILLAVENCIO 6192
96

63

66

Figura 10. Análise da reconstrução filogenética para a espécie Eulaema 
nigrita. À esquerda, loco COI, e à direita CytB. Análises feitas a 
partir do método de neighbour-joining, com 5000 réplicas. 

 

 

As redes de haplótipos também refletem a baixa 

estruturação encontrada, não havendo a formação de grupos 

que possam ser associados à origem geográfica das amostras. 

As únicas exceções são as amostras da Guiana Francesa para 

o loco COI (Figura 12) e de Villavencio (Colômbia) para o 

loco CytB (Figura 13), que apresentaram uma maior distância 

genética em relação ao haplótipo mais freqüente. 

A uniformidade dos haplótipos mitocondriais através de 

uma grande extensão geográfica, com as redes de haplótipos 

em formato de estrela, como observado, suporta a hipótese 

de uma expansão demográfica recente, ou uma curta história 

evolutiva para as populações, como relatado para outros 

organismos (Liu et al. 2005; Mirol et al. 2008; Zhao et al. 

2008). 

 

 



 

34 

 

 MANAUS 7816

 J PESSOA 10226

 VICOSA 7505

 GUARAPARI 10221

 RIFAINA 6181

 VICOSA 7503

 J PESSOA 10228

 RIFAINA 6180

 SAO CARLOS 6187

 MANAUS 7818

 S CARLOS 6186

 UBATUBA 10246

 CACERES 9798

 GUARAPARI 10223

 UBATUBA 10248

 MARLIERIA 7499

 MARLIERIA 7500

 VILLAVENCIO 6191

 VILLAVENCIO 619398

66

 
Figura 11. Análise filogenética de Neighbour-Joining (5000 réplicas) 

para os locos  CytB e COI concatenados (832pb) de Eulaema nigrita.  

 
 

 

 
Figura 12. Análise de clados aninhados para o loco COI de Eulaema 
nigrita: (PAN: Panamá, G FRC: Guiana Francesa, RIF: Rifaina, SC: São 
Carlos, MAN: Manaus, VIC: Viçosa, GUAR: Guarapari, JPES: João Pessoa, 
UBAT: Ubatuba, CAC: Cáceres). 

 

 
 
 
 



 

35 

 

 
 

Figura 13. Análise de clados aninhados para os loco CytB de Eulaema 
nigrita. (RIF: Rifaina, SC: São Carlos, MAN: Manaus, MARL: Marliéria, 
JPES: João Pessoa, GUAR: Guarapari, UBAT: Ubatuba, CAC: Cáceres, CGUI: 
Chapada dos Guimarães, CRIS: Cristalino, VIC: Viçosa). 

 

 

 

Na análise de Fst, as populações (agrupadas da mesma 

forma que para Ex. smaragdina) não foram significativamente 

diferentes umas das outras (dados não apresentados), e a 

AMOVA evidenciou que a maior parte da variação é 

compartilhada entre as populações dentro dos grupos 

(72,28%, p < 0,0001) e entre todas as populações (30,25%, p 

= 0,025) (Tabela 10). Estes dois testes demonstraram, mais 

uma vez, não haver estruturação nas populações de El. 

nigrita analisadas. 

 
Tabela 10. Valores obtidos para a AMOVA a partir dos locos 
concatenados COI e CytB para Eulaema nigrita.         
 

Tipo de variação 
Componentes 
da variação 

Porcentagem 
de variação 

Estatistica 
Phi 

P 

Entre grupos -0.023 Va -2.53 ΦCT= -0.025 0.389 

Entre populações 
dentro de grupos 

0.664 Vb 72.28 ΦSC= 0.704 0.025 

Entre populações 0.278 Vc 30.25 ΦST= 0.697 <0,0001 

 

 

RIF., SC., MAN., MARL., JPES., GUAR., 

UBAT., CAC., CGUI., CRIS., VIC.  



 

36 

 

É sugerido na literatura que Eulaema nigrita seja uma 

espécie característica de ambientes abertos e/ou 

perturbados (Morato et al. 1992; Peruquetti et al. 1999), 

sendo considerada uma espécie generalista. A elevada 

presença de El. nigrita em pequenos fragmentos de mata 

(Tonhasca 2002) e em ambientes urbanos (López-Uribe et al.  

2008) pode ser um indício de que houve uma grande expansão 

populacional desta espécie nos últimos 500 anos, quando o 

território brasileiro começou a ser devastado pelos 

colonizadores. Este processo certamente foi mais acentuado 

no último século, quando houve um grande aumento nas 

fronteiras agrícolas no Centro-Oeste, na expansão 

extrativista na Amazônia e o grande crescimento urbano na 

Mata Atlântica, que hoje conta com apenas 8% de sua 

cobertura original.  

 

 

4.5. Comparação entre os aspectos filogeográficos de Ex. 

smaragdina e sua hospedeira El. nigrita. 

A ausência de estruturação genética em El. nigrita e a 

aparente expansão geográfica recente contrastam com as 

populações estruturadas e aparentemente mais antigas de Ex. 

smaragdina.  

Apesar de haver evidências esparsas de outras espécies 

sendo parasitadas por Ex. smaragdina, os dados nos levam a 

concluir que a associação entre El. nigrita e Ex. 

smaragdina é relativamente recente, e que, quer em passado 

remoto ou recente, outras espécies além de El. nigrita 

foram parasitadas, pois não se pode sustentar a hipótese de 

populações de Ex. smaragdina estarem presentes em uma 

localidade antes de sua hospedeira. 

Outra possibilidade seria considerar uma taxa evolutiva 

maior para a espécie parasita, como já foi evidenciado em 

outras relações de mesma natureza. Hafner et al. (1994), 

estudando a relação entre uma espécie de roedores e seus 



 

37 

 

ectoparasitas, encontraram uma taxa evolutiva três vezes 

maior para o loco COI na espécie parasita, tanto em 

mutações sinônimas quanto não sinônimas, quando comparada à 

de seu hospedeiro. Resultados correlatos também foram 

encontrados em Hymenoptera por Dowton & Autin (1995). 

Resultados inconsistentes em filogenias de sistemas 

parasita-hospedeiro podem ocorrer por diferentes mecanismos 

entre os quais a mudança de hospedeiro (Page 1994; Paterson 

& Gray 1997; Page & Charleston 1998). 

Baseado na premissa de que o sucesso do parasitismo é 

parcialmente dependente de densidade e que espécies 

parasitas sejam ausentes ou pouco freqüentes em locais onde 

os parasitas não estão presentes (Weislo 1987), Nemésio & 

Silveira (2006) concluíram que El. nigrita não deve ser a 

única espécie parasitada por Ex. smaragdina, sugerindo que 

El. meriana possa ser uma hospedeira alternativa onde as 

duas espécies ocorrem em simpatria. 

Esta parece ser a explicação mais plausível para os 

resultados observados, podendo ser El. nigrita uma nova 

hospedeira de Ex. smaragdina, ou ainda sua hospedeira 

original, mas não exclusiva. 

Uma análise com uma maior amostragem e com outras 

possíveis hospedeiras (como El. meriana) podem revelar 

padrões filogeográficos mais acurados e uma possível 

explicação histórica para as associações cleptoparasíticas 

desta espécie. 

 

4.6. Análise do status de espécie de Exaerete 

lepeletieri baseado em caracteres genéticos 

Para acessar a diferenciação genética de Ex. 

lepeletieri em relação às duas espécies que lhe são mais 

próximas filogeneticamente foram seqüenciados os locos CytB 

e 16S.  

A diversidade nucleotídica em Ex. lepeletieri para o 

loco 16S foi semelhante à reportada para as populações de 



 

38 

 

Ex. smaragdina. Para o loco CytB, no entanto, Ex. 

lepeletieri apresentou um valor cerca de duas vezes maior 

de diversidade nucleotídica, com um número médio de 

variações nucleotídicas igualmente maior para este loco.  

Para Ex. frontalis não foram observados polimorfismos nos 

dois locos analisados (Tabelas 11 e 12).  

Os índices de diversidade genética entre as espécies 

demonstram que Ex. lepeletieri é mais próxima 

filogeneticamente de Ex. frontalis, enquanto as análises de 

Fst demontraram que as três espécies analisadas são 

diferentes entre si (valores significativos de P) (Tabelas 

13 e 14). 

 

 

Tabela 11. Diversidade genética (desvio padrão, 5.000 reamostragens)  
observada para as 3 espécies para 364pb do gene mitocondrial  
Citocromo B. 
 

Espécie 
Diversidade 
nucleotídica 

Nº médio de 
variações 

Exaerete lepeletieri 0.011 (0,007) 3.800 (2.294) 

Exaerete frontalis Sem polimorfismo Sem polimorfismo 

Exaerete smaragdina 0.005 (0.003) 1.7634 (1.051) 

 
 
 
 
 
 
 
Tabela 12. Diversidade nucleotídica e número médio de substituições 
(desvio padrão, 5.000 reamostragens) observada para as três espécies 
para 463pb do gene mitocondrial 16S. 
 

Espécie 
Diversidade 
nucleotídica 

Nº médio de 
variações 

Exaerete lepeletieri 0.003 (0.002) 1.238 (0.885) 

Exaerete frontalis Sem polimorfismo Sem polimorfismo 

Exaerete smaragdina 0.003 (0.002) 1.426 (0.891) 

 
 
 
Tabela 13. Diagonal inferior: Diversidade genética (Desvio padrão, 

5.000 re-amostragens) observada entre as 3 espécies para 364pb do gene 



 

39 

 

mitocondrial  Citocromo B. Diagonal superior: Fst par-a-par (Desvio 

padrão, 5.000 re-amostragens) observada entre as 3 espécies para 364pb 

do gene mitocondrial Citocromo B. 

 

  Ex. lepeletieri Ex. frontalis Ex. smaragdina 

Ex. lepeletieri  0.916 (p<0,001) 0.929 (p<0,0001) 

Ex. frontalis 0.020 (0.010)  0.917 (p<0,0001) 

Ex. smaragdina 0.052 (0.037) 0.060 (0.050)   

 
 
 
 
 

Tabela 14. Diagonal inferior: Diversidade genética (Desvio padrão, 

5.000 re-amostragens) observada entre as 3 espécies para 463pb do loco 

mitocondrial  16S. Diagonal superior: Fst par-a-par (Desvio padrão, 

5.000 re-amostragens) observada entre as 3 espécies para 463pb do gene 

mitocondrial Citocromo B. 

 

  Ex. lepeletieri Ex. frontalis Ex. smaragdina 

Ex. lepeletieri  0.672 (p<0,001) 0.874 (p<0,0001) 

Ex. frontalis 0.020 (0.007)  0.931 (p<0,0001) 

Ex. smaragdina 0.030(0.009) 0.028 (0.009)   

 

 

Os valores encontrados para os índices de diversidade 

genética e no teste de Fst foram corroborados pela 

reconstrução filogenética. 

Para o loco 16S, as três espécies formaram clados 

monofiléticos com altos valores de suporte. Segundo este 

loco, o status de espécie de Ex. lepeletieri é 

incontestável (Figura 14). 

Os resultados observados para o loco CytB, por outro 

lado, não são tão conclusivos. Parece evidente a existência 

de um clado monofilético entre Ex. lepeletieri e Ex. 

frontalis, sendo estas duas espécies mais próximas entre si 

do que de Ex. smaragdina. O mesmo já havia sido observado 

para o loco 16S. No entanto, Ex. lepeletieri não formou um 

grupo monofilético, mas sim dois grupos, sendo um deles 



 

40 

 

grupo-irmão de Ex. frontalis e outro que seria grupo-irmão 

deste clado (Figura 15). A natureza parafilética de Ex. 

lepeletieri para CytB contrasta-se, portanto com a 

monofilia observada em 16S. 

A ausência de monofilia para Ex. lepeletieri pode ser 

efeito de uma separação ainda incompleta das linhagens de 

Ex. lepeletieri e Ex. frontalis para este loco. É 

interessante notar que os dois indivíduos de Ex. 

lepeletieri que ficaram de fora do grupo irmão de frontalis 

(10500 e 10501) apresentavam um tamanho corporal menor 

(cerca de 18mm) do que os demais (cerca de 28mm). 

Infelizmente, o número de amostras analisadas foi pequeno 

(para o loco CytB ainda não foi possível seqüenciar dois 

indivíduos). Cerca de 30 novos espécimes desta espécie já 

foram enviados ao nosso laboratório e serão seqüenciados em 

breve, inclusive para novos locos. Esperamos em breve 

resultados mais conclusivos. 

Por fim, uma das amostras identificadas como Ex. 

smaragdina, proveniente de Pontes e Lacerda (MT), fronteira 

entre os domínios de Pantanal e Amazônia, apresentou 

seqüências nucleotídicas semelhantes à encontrada em Ex. 

lepeletieri, tanto para o loco 16S quanto para CytB. Desta 

forma, sugerimos que os limites geográficos desta espécie 

sejam revistos, uma vez que os dados moleculares indicam 

que ela não se restringe somente à floresta amazônica. 

 



 

41 

 

 16S LEPEL 10502

 16S LEPEL 10500

 16S LEPEL 10503

 16S LEPEL 10501

 PON E LACERDA 9799

 16S LEPEL 10505

 16S LEPEL 10504

 16S FRONT 10499

 16S FRONT 10495

 16S FRONT 10496

 16S FRONT 10497

 16S FRONT 10494

 MANAUS 9235

 CRISTALINO 9792

 PON E LACERDA 9800

 J PESSOA 7894

 RIFAINA 7640

 SAO CARLOS 7982

 16S APIS MELLIFERA

67

50

95

97

76

 
Figura 14. Reconstrução filogenética para o loco 16S para as espécies 
Ex. smaragdina, Ex. frontalis e para a possível espécie Ex. 
lepeletieri, pelo método de Neighbour-Joining (5000 réplicas). 

 

 

 CYTB FRONT 10496

 CYTB FRONT 10498

 CYTB FRONT 10497

 CYTB FRONT 10494

 CYTB FRONT 10495

 PON E LACERDA 9799

 CYTB LEPEL 10502

 CYTB LEPEL 10503

 CYTB LEPEL 10501

 CYTB LEPEL 10500

 SAO CARLOS 8021

 RIFAINA 7640

 J PESSOA 7584

 CRISTALINO 9792

 MANAUS 9235

 PON E LACERDA 9800

 CYTB APIS MELLIFERA

87

71

99

87
65

69

88

 
Figura 15. Reconstrução filogenética para o loco Citocromo B para as 
espécies Ex. smaragdina, Ex. frontalis e para a possível espécie Ex. 
lepeletieri, pelo método de Neighbour-Joining (5000 réplicas). 

 

 



 

42 

 

5. CONSIDERAÇÕES FINAIS E PERSPECTIVAS 

5.1. Estudos filogeográficos na América do Sul 

Há poucos dados na literatura sobre filogenética 

molecular e evolução intra-específica em Euglossini. 

Aspectos gerais sobre a evolução das espécies do grupo já 

foram relatados (Engel 1999; Cameron 2004) e apenas um 

trabalho sobre caracterização molecular intraespecífica, 

utilizando-se marcadores RFLP é encontrado na literatura 

(López-Uribe & Del Lama 2007). 

O único trabalho filogeográfico publicado até o momento 

(Dick et al. 2004) restringe-se à influência dos Andes na 

diversificação de Euglossini. As possíveis rotas evolutivas 

destes organismos no Brasil e na América do Sul são 

praticamente desconhecidas.  

Desta forma, o presente estudo fornece as primeiras 

informações sobre a filogeografia de Euglossini no Brasil. 

Dois padrões distintos de evolução foram observados. Para 

Exaerete smaragdina, populações estruturadas 

geograficamente e duas possíveis rotas evolutivas (Mata 

Atlântica e Amazônia + Pantanal). Para Eulaema nigrita, os 

dados apontam para uma rápida expansão populacional e 

populações não estruturadas, talvez um reflexo de sua alta 

incidência em ambientes perturbados. 

Contudo, deve-se salientar que o grupo de Euglossini 

apresenta uma grande diversidade, com muitas espécies 

distribuídas por um largo território. Estudos subseqüentes, 

baseado em um maior número de espécies e maiores 

amostragens certamente aumentarão nosso conhecimento sobre 

as rotas evolutivas desta tribo. 

 

5.2. Filogeografia comparada em sistemas parasita-
hospedeiro. 

A interação entre espécies é um mecanismo fundamental 

para os padrões macro-evolucionários de diversificação. Um 

dos exemplos mais relevantes de interação interespecífica é 



 

43 

 

o padrão co-evolutivo encontrado em sistemas parasita-

hospedeiro (Page 2003).  

Os trabalhos mais relevantes nesta área são os 

trabalhos pioneireos de Roderick Page (Page 1990, 1991; 

Hafner & Page 1995; Johnson et al. 2003) e os trabalhos 

mais atuais de Nieberding (Nieberding et al. 2004, 2005, 

2006, 2008; Nieberding & Olivieri 2007). No entanto, a 

maioria dos trabalhos refere-se a sistemas de 

endoparasitismo ou de ectoparasitismo nos quais o ciclo de 

vida do hospedeiro depende completamente da associação 

parasítica (reprodução, locomoção e alimentação). 

No caso de cleptoparasitismo (deposição de ovos no 

ninho da espécie parasitada), não há trabalhos relevantes 

sobre filogeografia comparada. O estudo filogeográfico mais 

relevante em Hymenoptera indica que há um aumento da 

diversidade genética nos genes mitocondriais em linhagem 

onde ocorreu a evolução do modo de vida parasítico (Dowton 

& Austin 1995). 

Os dados aqui apresentados são os primeiros resultados 

moleculares que apontam que El. nigrita não deve ser a 

única hospedeira de Ex. smaragdina. Novamente, uma maior 

amostragem pode trazer uma maior confiabilidade nos 

resultados. Além disso, a análise de outras espécies 

hospedeiras em potencial, como El. meriana, ou ainda de 

outras parasitas como Ex. frontalis e Aglae caerula podem 

ajudar a entender a evolução deste comportamento na tribo 

Euglossini. 

 

5.3. Determinação do status de espécie por marcadores 

moleculares 

Genealogias feitas a partir do DNA mitocondrial 

geralmente têm resolução suficiente para mostrar as 

descontinuidades biológicas reconhecidas pelos taxonomistas 

como espécies (Hebert 2004). Com base neste fato, revisões 

taxonômicas ao nível de espécie têm incluído análises de 



 

44 

 

divergência do DNA mitocondrial. Por exemplo, algumas 

espécies de pássaros recentemente identificadas têm sido 

parcialmente definidas com base em divergências 

filogenéticas (Avise & Zink 1988; Murray et al. 1994; Banks 

et al. 2002, 2003, p. e.). 

Em um trabalho recente, Nemésio (2009) reavaliou 

morfologicamente a categoria de quatro espécies, além de 

identificar novas espécies de Euglossini, todas de 

ocorrência na Mata Atlântica. Além disso, discute a 

possibilidade de Exaerete frontalis não ser uma única 

espécie, mas sim duas, uma da Amazônia e outra da Mata 

Atlântica.  

Mesmo com toda discussão taxonômica em Euglossini, 

ainda não há nenhum estudo na literatura sobre a 

confirmação da monofilia das espécies deste grupo.  

Para Ex. lepeletieri, foi possível observar que ela 

realmente é uma nova espécie, e uma amostragem maior ainda 

poderá informar se, na verdade, ela não constitui duas 

novas espécies.  

Como esta metodologia será aplicada cada vez mais 

frequentemente em amostras deste grupo, as incongruências 

taxonômicas observadas em Euglossini deverão ser 

resolvidas. 

Desta forma, este trabalho contribui com as primeiras 

informações filogeográficas de Euglossini no território 

brasileiro, as possíveis influências dos domínios 

biogoegráficos nas rotas evolutivas e as relações entre 

parasita-hospedeiros encontradas dentro da tribo, e traz à 

tona a discussão sobre a confirmação do status das novas 

espécies recentemente descritas.  

 



 

45 

 

6. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 
 

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