dc.contributor.author | Bacher, Patrícia Hergert | |
dc.date.accessioned | 2018-06-14T19:35:55Z | |
dc.date.available | 2018-06-14T19:35:55Z | |
dc.date.issued | 2016-09-29 | |
dc.identifier.citation | BACHER, Patrícia Hergert. Parâmetros seminais e extração de RNA espermático de mico-leão-de-cara-dourada (Leontopithecus chrysomelas). 2016. Dissertação (Mestrado em Conservação da Fauna) – Universidade Federal de São Carlos, São Carlos, 2016. Disponível em: https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/10165. | * |
dc.identifier.uri | https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/10165 | |
dc.description.abstract | The Golden-headed lion tamarin (Leontopithecus chrysomelas) is an endemic primate from
Atlantic Forest threatened with extinction. Amongst the conservational efforts addressed
towards the species is the use of reproductive biotechnologies as a strategy of genetic
resources preservation and assurance of captive and natural population´s viability. The
success of the reproductive biotechnologies still depends on the detailed knowledge despite
the reproductive aspects, the investigation of factors that may influence the reproductive
success and the establishment of specific-species protocols. The cryopreservation of semen is
the most widely used approach for wild species. However, one major challenge associated to
the appliance of neotropical primate´s samples consists in the formation of seminal clots,
which invalidates the use of great quantity of gamete in most reproductive procedures. The
golden-headed lion tamarin has become a promising model among threatened neotropical
primates and aiming to contribute with the development of reproductive technologies, this
essay had the objective of initiate investigations concerning the molecular and seminal factor
which may have an effect on the reproductive potential of sexually mature males of
Leontopithecus chrysomelas. Therefore, the animals kept at the Fundação Parque Zoológico
de São Paulo, São Paulo, Brazil, were divided into two groups, “Old” (mean age 11,6 years;
n=6) and “Young” (mean age 4,8 years, n=6) to execute the semen collection and evaluation
of the seminal parameters (concentration, motility, plasmatic and acrosome membrane
integrity, mitochondrial cytochemical activity and morphology). The analysis of seminal
parameters pointed out significant differences between the older and younger subjects despite
the plasmatic membrane integrity (p=0,049), acrosome integrity (p=0,009) and for Class IV
mitochondrial activity (p=0,026). The regression analysis showed that the age, as well as the
weight of the individuals, have a negative influence over the quality of these parameters.
Therefore, aiming to contribute with the development of new reproductive techniques and to
improve the spermatic viability, a protocol of sperm selection by Percoll discontinuous
gradient was tested. However, even though efficient for gamete isolation from other seminal
component, the protocol did not show significant improvement of the parameters, reevaluated
after selection, suggesting needing of methodological adequation for and effective application
in Leontopithecus chrysomelas. To start investigating the gamete´s epigenetic role in male
reproductive success, this essay established a sperm RNA isolation protocol, highlighting the
use of seminal clot, a rich source of genetic material, which is usually thrown away after
processing. The samples of each individual were condensed in two pools, one referring the
clot and other to the liquid fraction. Adaptations for the somatic cellular lyse allowed
obtainment of similar profiles between the two portions of the ejaculate. The qualitative
profiles for sperm RNA of Leontopithecus chrysomelas indicates low concentration of
molecules bigger than RNA, being represented, basically, by little and degraded transcripts
due to silencing of gene expression in spermatozoa. The spermatic transcripts have been
assigned as the determinant function in reproduction, enrolled with the regulation of female
gamete activation and gene expression at the beginning of the embryo development.
Furthermore, is has been proposed that the quantity of RNA present in gametes be used as a
non-invasive tool for deducing male fertility, since these transcripts reflect on events that
occur during cellular differentiation. | eng |
dc.description.sponsorship | Outra | por |
dc.language.iso | por | por |
dc.publisher | Universidade Federal de São Carlos | por |
dc.rights.uri | Acesso aberto | por |
dc.subject | Primatas neotropicais | por |
dc.subject | Criopreservação de sêmen | por |
dc.subject | Biotécnicas reprodutivas | por |
dc.subject | Neotropical primate | eng |
dc.subject | Cryopreservation of semen | eng |
dc.subject | Reproductive biotechnologies | eng |
dc.title | Parâmetros seminais e extração de RNA espermático de mico-leão-de-cara-dourada (Leontopithecus chrysomelas) | por |
dc.type | Dissertação | por |
dc.contributor.advisor1 | Peripato, Andréa Cristina | |
dc.contributor.advisor1Lattes | http://lattes.cnpq.br/0657713343451089 | por |
dc.contributor.advisor-co1 | Valle, Rodrigo del Rio do | |
dc.contributor.advisor-co1Lattes | http://lattes.cnpq.br/2879780464444096 | por |
dc.description.resumo | O mico-leão-de-cara-dourada (Leontopithecus chrysomelas) é um primata endêmico da Mata
Atlântica ameaçado de extinção. Entre os esforços de conservação endereçados à espécie está
a utilização de biotécnicas reprodutivas como estratégia de preservação dos recursos genéticos
e garantia da viabilidade das populações em cativeiro e ambiente natural. O sucesso das
biotécnicas reprodutivas depende ainda do conhecimento detalhado acerca de aspectos
reprodutivos, da investigação de fatores que possam influenciar o sucesso reprodutivo e do
estabelecimento de protocolos espécie-específicos. A criopreservação de sêmen consiste na
abordagem mais empregada em espécies silvestres. Contudo, um dos grandes desafios
associados à aplicação de amostras de primatas neotropicais compreende à formação do
coágulo seminal, que inviabiliza a utilização de uma grande quantidade de gametas na maioria
dos procedimentos reprodutivos. O mico-leão-de-cara-dourada tem se mostrado um modelo
promissor entre os primatas neotropicais ameaçados e visando contribuir com o
desenvolvimento de biotécnicas reprodutivas este trabalho teve por objetivo iniciar as
investigações acerca de fatores seminais e moleculares que possam influenciar o potencial
reprodutivo de machos sexualmente maduros de Leontopithecus chrysomelas. Para tanto, os
animais, mantidos na Fundação Parque Zoológico de São Paulo, São Paulo, Brasil, foram
divididos em dois grupos, "Velhos" (idade média 11,6 anos; n=6) e "Jovens" (idade média de
4,8 anos; n=6) para a realização da colheita de sêmen e avaliação dos parâmetros seminais
(concentração, motilidade, integridade da membrana plasmática e acrossômica, atividade
citoquímica mitocondrial e morfologia). A análise dos parâmetros seminais apontou
diferenças significativas entre indivíduos velhos e jovens com relação à integridade de
membrana plasmática (p=0,049), integridade de membrana do acrossoma (p=0,009) e para a
Classe IV de atividade mitocondrial (p=0,026). As análises de regressões evidenciaram que a
idade, assim como o peso dos indivíduos, exerce influência negativa sobre a qualidade desses
parâmetros. Ademais, visando contribuir com o desenvolvimento de novas técnicas
reprodutivas e com a melhoria da viabilidade espermática, foi testado um protocolo de seleção
espermática em gradiente descontínuo de Percoll. Contudo, mesmo que eficiente para o
isolamento de gametas dos demais componentes seminais, o protocolo não resultou em
melhora significativa dos parâmetros reavaliados após a seleção, sugerindo a necessidade de
adequação metodológica para a efetiva aplicação em Leontopithecus chrysomelas. Para dar
início as investigações do papel epigenético do gameta masculino no sucesso reprodutivo, o
presente trabalho estabeleceu um protocolo de extração de RNA espermático, com destaque
para a utilização do coágulo seminal, material que consiste de uma fonte rica de material
genético, mas que costuma ser descartado após o processamento. As amostras de cada
indivíduo foram concentradas em dois pools, um referente ao coágulo e outro à fração líquida.
Adaptações para a lise de células somáticas permitiram a obtenção de perfis semelhantes entre
as duas porções do ejaculado. Os perfis qualitativos do RNA espermático de Leontopithecus
chrysomelas indicam baixa concentração de moléculas maiores de RNA, sendo basicamente
representados por transcritos pequenos e transcritos degradados em decorrência do
silenciamento da expressão gênica nos espermatozoides. Aos transcritos espermáticos vem
sendo atribuída função determinante na reprodução, envolvida com a regulação da ativação do
gameta feminino e da expressão gênica no início do desenvolvimento do embrião. Além
disso, tem sido proposto que a quantidade de RNA presente nos gametas seja utilizada como
ferramenta não invasiva para inferência da fertilidade masculina, uma vez que estes
transcritos refletem eventos ocorridos durante a diferenciação celular. | por |
dc.publisher.initials | UFSCar | por |
dc.publisher.program | Programa de Pós-Graduação em Conservação da Fauna - PPGCFau | por |
dc.subject.cnpq | CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIA::REPRODUCAO ANIMAL::INSEMINACAO ARTIFICIAL ANIMAL | por |
dc.ufscar.embargo | Online | por |
dc.publisher.address | Câmpus São Carlos | por |
dc.contributor.authorlattes | http://lattes.cnpq.br/9008338904998266 | por |