dc.contributor.author | Moreira, Ariele Cristina | |
dc.date.accessioned | 2018-06-18T18:01:00Z | |
dc.date.available | 2018-06-18T18:01:00Z | |
dc.date.issued | 2018-04-06 | |
dc.identifier.citation | MOREIRA, Ariele Cristina. Estudos da expressão e da função do gene sintase de quitina em Atta sexdens. 2018. Tese (Doutorado em Química) – Universidade Federal de São Carlos, São Carlos, 2018. Disponível em: https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/10179. | * |
dc.identifier.uri | https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/10179 | |
dc.description.abstract | In Brazil, leaf-cutting ants belonging to the genus Atta and Acromyrmex and are considered as pests in agricultural and forestry regions that can lead to great economic losses. The aim of this work was to identify the transcripsts sequence that codify to chitin synthase in Atta sexdens (AsCHS), which has been described as the main enzyme in the metabolism of chitin synthesis. Evaluate the gene expression of AsCHS during insect developmental stage (larva, pupa and medium worker) and different body parts from medium worker (head, mesosome and worker without gaster), validate reference genes for quantitative PCR (qPCR) and evaluate the gene function by gene silencing through RNAi-mediated. The sequence coding to AsCHS was amplified by PCR based on conserved regions for insect CHSs, since the genome of that ant is not available. Two isoforms, from alternative splicing of the same gene were identified and sequenced. For gene expression analysis through qPCR, the reference gene for A. sexdens were determined, ef1-alpha and rpl18 for developmental stages and rpl18 and ef1-beta for different body parts from medium worker. The AsCHS is expressed in a different level during ant development, being pupa the developmental stage with the highest level of transcripts and the mesosome and worker without gaster, among the body parts from medium worker. The gene function was evaluated by gene silencing through RNAi-mediated in pupae. A reduction of 18 % of the CHS transcripts level was verified 168 h (7 days) after the injection of 300 ng of siRNA for AsCHS compared to the controls, resulting in pupae with morphological changes and an almost 50 % of ant’s mortality. This result show that AsCHS is an important enzyme for the development of A. sexdens. To the best of our knoledge, this is the first work to use the RNA interference techniques and quantification of transcripts by qPCR in leaf-cutting ants. | eng |
dc.description.sponsorship | Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) | por |
dc.description.sponsorship | Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) | por |
dc.language.iso | por | por |
dc.publisher | Universidade Federal de São Carlos | por |
dc.rights.uri | Acesso restrito | por |
dc.subject | Sintase de quitina | por |
dc.subject | Análise da expressão gênica | por |
dc.subject | Silenciamento gênico | por |
dc.subject | Atta sexdens | eng |
dc.subject | Chitin synthase | eng |
dc.subject | Gene expression analysis | eng |
dc.subject | Gene silencing | eng |
dc.title | Estudos da expressão e da função do gene sintase de quitina em Atta sexdens | por |
dc.title.alternative | Studies of expression and function of chitin synthase gene in Atta sexdens | eng |
dc.type | Tese | por |
dc.contributor.advisor1 | Souza, Dulce Helena Ferreira de | |
dc.contributor.advisor1Lattes | http://lattes.cnpq.br/3428955299526003 | por |
dc.description.resumo | No Brasil, as formigas-cortadeiras pertencem aos gêneros Atta e Acromyrmex e são consideradas pragas em regiões agrícolas e florestais, levando a grandes perdas econômicas. A proposta deste trabalho foi identificar a sequência de transcritos que codificam para sintase de quitina em Atta sexdens (AsCHS), que tem sido descrita como a principal enzima do metabolismo de síntese de quitina. Também foram objetivos avaliar a expressão gênica da AsCHS ao longo do desenvolvimento do inseto (larva, pupa e operária média) e em diferentes partes do corpo de operária média (cabeça, mesossoma e operária sem gáster), validar genes de referência para a PCR quantitativo (qPCR) e avaliar a função da AsCHS por silenciamento gênico. A sequência que codifica para a síntese da AsCHS foi amplificada por PCR com base em regiões conservadas de CHSs de insetos, uma vez que o genoma desta formiga não está disponível. Duas isoformas, advindas de splicing alternativo do mesmo gene foram identificadas e sequenciadas. Para análise da expressão gênica por qPCR foram determinados genes de referência para A. sexdens, ef1-alpha e rpl18 para estágios de desenvolvimento e rpl18 e ef1-beta para as diferentes partes do corpo de operária média. A AsCHS é diferencialmente expressa ao longo do desenvolvimento da formiga, sendo pupa o estágio de desenvolvimento com maior nível de transcritos. Nas diferentes partes do corpo de operária, houve maior expressão de transcritos de AsCHS no mesossoma e em operária sem gáster. A função do gene AsCHS foi avaliada por silenciamento gênico mediado por RNAi em pupas. Uma redução de 18 % no nível de transcritos de CHS foi verificada 168 h (7 dias) após a injeção de 300 ng de siRNA para AsCHS em relação aos controles, resultando em pupas com alterações morfológicas e uma mortalidade aproximada de 50 %. Este resultado mostra que a AsCHS é uma enzima importante para o desenvolvimento da A. sexdens. Do conhecimento atual, este foi o primeiro trabalho a utilizar as técnicas de RNA de interferência e quantificação de transcritos por qPCR em formigas-cortadeiras. | por |
dc.publisher.initials | UFSCar | por |
dc.publisher.program | Programa de Pós-Graduação em Química - PPGQ | por |
dc.subject.cnpq | CIENCIAS EXATAS E DA TERRA::QUIMICA | por |
dc.ufscar.embargo | 6 meses após a data da defesa | por |
dc.publisher.address | Câmpus São Carlos | por |
dc.contributor.authorlattes | http://lattes.cnpq.br/1371170514618038 | por |