dc.contributor.author | Iceri, Taciane Mitsuko | |
dc.date.accessioned | 2018-09-11T14:22:16Z | |
dc.date.available | 2018-09-11T14:22:16Z | |
dc.date.issued | 2011-04-29 | |
dc.identifier.citation | ICERI, Taciane Mitsuko. Avaliação sistemática do efeito de matriz em ensaios bioanalíticos por LC-MS/MS para a análise de rifampicina em fluidos biológicos. 2011. Dissertação (Mestrado em Química) – Universidade Federal de São Carlos, São Carlos, 2011. Disponível em: https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/10451. | * |
dc.identifier.uri | https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/10451 | |
dc.description.abstract | Bioanalytical assays by LC-MS/MS were conducted in order to investigate the
matrix effect (ME) in the analysis of rifampicin (RIF) in biological matrices, human
plasma or microsomal fractions, which were submitted to different sample
pretreatment procedures: 1) off-line – solid phase extraction (SPE), protein
precipitation using acetonitrila (PP(ACN)) or methanol (PP(MeOH)) and 2) on-line –
by using of a restricted access media (RAM) bovine serum albumin (BSA) octyl
column in a single or multidimensional mode of analysis. The ME was also
determined through the employment of different chromatographic conditions and
different mechanisms of ionization. Conventional stationary phases (C18 Nucleosil
homemade; 5 μm, 100 Å) and columns with Fused Core technology (C18 Supelco
Ascentis® Express; 2,7 μm, 90 Å), as well as, atmospheric pressure chemical
ionization (APCI) and electrospray (ESI) were investigated in this work. Among the
off-line sample clean-up (RIF 50 g/mL) procedures evaluated in the quantitative ME
experiments by LC-ESI-MS/MS, it was found that SPE showed to be more efficient in
the reduction of ME. Additionally, the chromatographic conditions using the Ascentis
Express column provided the best result for ME reduction. Therefore, the Ascentis
Express column was chosen to be used in the evaluation of the ionization
mechanisms in either quantitative or qualitative experiments using off-line extraction
configuration and, in all results obtained, the ESI ionization was less susceptible to
ME than APCI. The assays of biological samples spiked before and after the off-line
clean-up procedures also provided results for recovery (RE) and process efficiency
(PE). For the sample preparation using the on-line RAM-C8-BSA column (5,0 x 0,46
cm I.D.; 10 m, 100 Å) two methods were developed: 1) single mode and 2)
multidimensional configuration of analysis, with the C18 Ascentis Express in the
second chromatographic dimension. In these procedures the ESI ionization was the
ionization source employed. The ME was measured for RIF (500 ng/mL) and when
the microsomal fractions was the biological fluid, the multidimensional configuration
allowed a reduction of ME from 47.86 % to 14.63 % by comparing to the single mode
result. For the human plasma was not possible to obtain a ME profile since this
Abstract / xxvi
comparison was hampered by the unidimensional data (RSD = 38.73 %). In most
cases, when the results obtained from microsomal fractions and human plasma were
compared, there was no predominant ME correlation between both matrices for all
extraction procedures off-line and on-line. In this work, the rifampicin LC-MS/MS
analysis was performed in positive ion mode, monitoring the m/z 823 791
transition. | eng |
dc.description.sponsorship | Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) | por |
dc.language.iso | por | por |
dc.publisher | Universidade Federal de São Carlos | por |
dc.rights.uri | Acesso aberto | por |
dc.subject | Química analítica | por |
dc.subject | Cromatografia líquida | por |
dc.subject | Preparação de amostra (Química analítica) | por |
dc.subject | Fontes de ionização | por |
dc.subject | Eficiência cromatográfica | por |
dc.title | Avaliação sistemática do efeito de matriz em ensaios bioanalíticos por LC-MS/MS para a análise de rifampicina em fluidos biológicos | por |
dc.title.alternative | Systematic evaluation of the matrix effect in bioanalytical assays for rifampicin analysis in biological fluids by LC-MS/MS | eng |
dc.type | Dissertação | por |
dc.contributor.advisor1 | Oliveira, Regina Vincenzi | |
dc.contributor.advisor1Lattes | http://lattes.cnpq.br/6609377714413073 | por |
dc.description.resumo | Ensaios bioanalíticos por LC-MS/MS foram conduzidos a fim de investigar o
efeito de matriz (ME) na análise de rifampicina (RIF) em matrizes biológicas, plasma
humano ou frações microssomais, submetidas a diferentes procedimentos de prétratamento
de amostras: 1) off-line – extração em fase sólida (SPE), precipitação de
proteínas com acetonitrila (PP(ACN)) ou metanol (PP(MeOH)) e 2) on-line –
emprego da coluna de meio de acesso restrito (RAM) de albumina sérica bovina
(BSA) de suporte C8 no modo simples ou multidimensional de análise. O ME
também foi determinado quando diferentes eficiências cromatográficas e
mecanismos de ionização foram utilizados. Foram selecionadas fases estacionárias
convencionais (C18 Nucleosil homemade; 5 μm, 100 Å) e colunas com tecnologia
Fused Core (C18 Supelco Ascentis® Express; 2,7 μm, 90 Å) e fontes de ionização
química a pressão atmosférica (APCI) e electrospray (ESI) foram empregadas.
Dentre os procedimentos off-line de tratamento de amostras (RIF 50 g/mL)
utilizados nos experimentos quantitativos de determinação do ME por LC-ESIMS/
MS constatou-se que a SPE foi o procedimento mais eficiente na redução do ME
e a coluna Ascentis Express foi a condição cromatográfica que promoveu uma
melhor redução do ME. Dessa forma, para a avaliação de distintos mecanismos de
ionização foi selecionada a coluna Ascentis Express e, por meio de experimentos
quantitativos e qualitativos de determinação do ME, notou-se que a ionização por
ESI foi menos susceptível ao ME que a APCI, em ambos os experimentos, sendo a
extração procedida na configuração off-line. Os experimentos de fortificação das
amostras biológicas antes e depois do procedimento de extração off-line forneceram
também valores de recuperação (RE) e eficiência de processo (PE). Para o preparo
de amostra com emprego on-line da coluna RAM-C8-BSA (5,0 x 0,46 cm D.I.; 10
m, 100 Å) foram desenvolvidos dois métodos: 1) no modo simples e 2) na
configuração multidimensional de análise, com a fase estacionária C18 Ascentis
Express na segunda dimensão. Neste procedimento foi utilizada a ionização por ESI.
O ME foi quantificado (RIF 500 ng/mL) e, para as frações microssomais, a adição da
Resumo / xxiii
segunda dimensão de análise (multidimensional) proporcionou uma redução do ME
de 47,86 % para 14,63 %. Para o plasma humano não foi possível indicar um perfil
de ME, uma vez que esta comparação foi comprometida pelos dados
correspondentes ao método unidimensional (CV = 38,73 %). Confrontando os
resultados obtidos para as frações microssomais e plasma humano, para todos os
procedimentos de extração off-line e on-line, verificou-se, de maneira geral, que não
houve uma relação de ME predominante entre as duas matrizes. Neste projeto, a
análise da rifampicina por LC-MS/MS foi procedida no modo positivo, monitorando a
transição m/z 823 791. | por |
dc.publisher.initials | UFSCar | por |
dc.publisher.program | Programa de Pós-Graduação em Química - PPGQ | por |
dc.subject.cnpq | CIENCIAS EXATAS E DA TERRA::QUIMICA | por |
dc.ufscar.embargo | Online | por |
dc.publisher.address | Câmpus São Carlos | por |
dc.contributor.authorlattes | http://lattes.cnpq.br/9365883330503284 | por |