dc.contributor.author | Minari, Karine | |
dc.date.accessioned | 2018-09-19T19:50:08Z | |
dc.date.available | 2018-09-19T19:50:08Z | |
dc.date.issued | 2018-07-31 | |
dc.identifier.citation | MINARI, Karine. Estudos comparativos da interação de Hsp90 de diferentes organismos com nucleotídeos adenosina e caracterização da Aha4 de Plasmodium falciparum. 2018. Tese (Doutorado em Genética Evolutiva e Biologia Molecular) – Universidade Federal de São Carlos, São Carlos, 2018. Disponível em: https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/10483. | * |
dc.identifier.uri | https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/10483 | |
dc.description.abstract | Hsp90 (heat shock protein of 90 kDa) are among the most abundant proteins in non-stressed cells. They interact with proteins that are not in the native state, correcting their incorrect folding, they participate in signal transduction pathways, apoptosis and they are also involved in cell growth and development, protein maturation and activation, among others. In protozoa such as Plasmodium falciparum and Leishmania braziliensis, Hsp90 participate in the growth, development, differentiation and survival of the parasites. In this way, they become attractive targets for treatment of diseases such as malaria, leishmaniasis and cancer. Hsp90 do not act alone because they are involved in a complex network with other proteins, especially the co-chaperones. Aha protein (Activator of the Hsp90-ATPase Activity) is a co-chaperone that activate the ATPase activity of Hsp90, which is composed by two canonical domains localized at the N- and C-terminus, respectively, binding at the chaperone dimer interfaces. This interaction is also targeted for the treatment of diseases. The objectives of the first chapter of this work were to perform a comparative study to characterize the interaction of yeast, L. braziliensis, P. falciparum, sugarcane and human α and β isoforms with nucleotides adenosine ATP and ADP by isothermal titration calorimetry, nuclear magnetic resonance and molecular dynamics. The estimation of the ATPase activity of the Hsp90 proteins of P. falciparum and L. braziliensis, as well as the evaluation of the inhibition of Hsp90 by classical inhibitors of Hsp90 (geldanamycin and radicicol) were also performed. In parallel, for PfAha4 protein (Aha type 4 of P. falciparum), structural studies such as circular dichroism spectrophotometry, fluorescence spectroscopy, analytical ultracentrifugation and small angle X-ray scattering (SAXS) were performed (shown in chapter 2 of this thesis). For the interaction characterization, ITC experiments were performed in order to test the PfAha4 interaction with P. falciparum Hsp90 protein (PfHsp90). The experiments showed that the mode of interaction of Hsp90 with ATP and ADP are different, probably due to the microstates that the binders experience at the interaction site. Thus, despite the high sequence similarity of these proteins, selective inhibition can be achieved. For PfAha4, which is composed by the canonical C-terminal Aha domain, the results showed that it has similar properties with other Ahas. It is a globular monomer in solution and showed high affinity for PfHsp90 in a stoichiometry of 2:1. | eng |
dc.description.sponsorship | Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) | por |
dc.language.iso | por | por |
dc.publisher | Universidade Federal de São Carlos | por |
dc.rights.uri | Acesso restrito | por |
dc.subject | Hsp90 | por |
dc.subject | Chaperonas moleculares | por |
dc.subject | Molecular chaperones | eng |
dc.title | Estudos comparativos da interação de Hsp90 de diferentes organismos com nucleotídeos adenosina e caracterização da Aha4 de Plasmodium falciparum | por |
dc.title.alternative | Comparative studies of the interaction of Hsp90 from different organisms with adenosine nucleotides and characterization of Plasmodium falciparum Aha4 | eng |
dc.type | Tese | por |
dc.contributor.advisor1 | Borges, Júlio Cesar | |
dc.contributor.advisor1Lattes | http://lattes.cnpq.br/6033516785481779 | por |
dc.description.resumo | As Hsp90 (do inglês “heat shock protein of 90 kDa”) estão entre as proteínas mais abundantes nas células não submetidas a estresses. Elas interagem com proteínas que não estão no estado nativo, corrigindo o seu enovelamento incorreto, participam de vias de transdução de sinal, apoptose e também estão envolvidas no crescimento e desenvolvimento celular, maturação e ativação de proteínas, entre outras. Em protozoários como Plasmodium falciparum e Leishmania braziliensis, as Hsp90 participam do crescimento, desenvolvimento, diferenciação e sobrevivência dos parasitas. Deste modo, elas tornam-se alvos atrativos para o tratamento de doenças como malária, leishmaniose e câncer. As Hsp90s não atuam sozinhas e estão envolvidas em uma rede complexa com outras proteínas, principalmente as co-chaperonas. A proteína Aha (Activator of the Hsp90-ATPase Activity) é uma co-chaperona que ativa a atividade ATPásica da Hsp90. Ela é composta por dois domínios canônicos localizados no N-terminal e C-terminal, respectivamente, que se ligam nas interfaces do dímero de Hsp90. Esta interação também é alvo para o tratamento de doenças. Os objetivos do primeiro capítulo deste trabalho foram realizar um estudo comparativo para caracterizar a interação das proteínas Hsp90 de S. cerevisiae, L. braziliensis, P. falciparum, Saccharum sp. e isoformas α e β humanas com os nucleotídeos adenosina ATP e ADP através de calorimetria de titulação isotérmica, ressonância magnética nuclear e dinâmica molecular. A avaliação da atividade ATPásica das proteínas Hsp90 de P. falciparum e L. braziliensis, bem como a avaliação da inibição da mesma por inibidores clássicos de Hsp90 (geldanamicina e radicicol) também foi realizada. Paralelamente, a proteína PfAha4 (Aha tipo 4 de P. falciparum), foi estudada, e foram realizados estudos estruturais como espectropolarimetria de dicroísmo circular, espectroscopia de fluorescência, ultracentrifugação analítica e espalhamento de raios-X a baixos ângulos (mostrados no capítulo 2 desta tese). Para a os ensaios de interação, foram realizados experimentos de ITC para testar a interação dela com a proteína Hsp90 de P. falciparum (PfHsp90). Os experimentos mostraram que o modo de interação das Hsp90 com ATP e ADP são diferentes, provavelmente devido aos microestados que os ligantes experimentam no sítio de interação. Deste modo, apesar da alta similaridade de sequências de que estas proteínas apresentam, a inibição seletiva pode ser alcançada. Para a PfAha4, que é composta pelo domínio C-terminal canônico das Ahas, os resultados mostraram que ela apresenta propriedades similares com outras Ahas. Ela é um monômero globular em solução e interage com alta afinidade com a PfHsp90 com estequiometria de 2:1. | por |
dc.publisher.initials | UFSCar | por |
dc.publisher.program | Programa de Pós-Graduação em Genética Evolutiva e Biologia Molecular - PPGGEv | por |
dc.subject.cnpq | CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOFISICA::BIOFISICA MOLECULAR | por |
dc.subject.cnpq | CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA::BIOLOGIA MOLECULAR | por |
dc.description.sponsorshipId | Processo FAPESP 2013/25646-0 | por |
dc.ufscar.embargo | 18 meses após a data da defesa | por |
dc.publisher.address | Câmpus São Carlos | por |
dc.contributor.authorlattes | http://lattes.cnpq.br/0606283087212995 | por |