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dc.contributor.authorMoraes, Caroline Krieger de
dc.date.accessioned2016-06-02T19:22:00Z
dc.date.available2007-07-06
dc.date.available2016-06-02T19:22:00Z
dc.date.issued2006-06-08
dc.identifier.citationMORAES, Caroline Krieger de. Efeito da rACLF, uma metalopeptidase recombinante da peçonha de Agkistrodon contortrix laticinctus, na viabilidade celular, expressão de citocinas e degradação de proteínas da matriz extracelular.. 2006. 98 f. Tese (Doutorado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de São Carlos, São Carlos, 2006.por
dc.identifier.urihttps://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/1195
dc.description.abstractACLF is a fibrinolytic non-hemorrhagic metallopeptidase from the venom of the snake Agkistrodon contortrix laticinctus. rACLF is synthesized as a zymogen (pro- ACLF) with 412 aminoacids, while the active form of enzyme has 222 aminoacids. The ORF (open reading frame) that codes for the peptidase was isolated (from a cDNA venom gland library of A. contortrix. lacticinctus ) and characterized. This work shows the effects of rACLF on endothelial cells (HUVECs), tumor cells (HeLa, MDA-MB-231 and MCF-7) and non-tumor cell (fibroblast) as well its proteolytic activity on extracellular matrix proteins. Our results showed that rACLF inhibited the apoptosis induced by serum deprivation in HUVECs, but had no effect on cell proliferation. rACLF had direct effect on HUVECs, since it was observed an increased amount of IL-8 in the cell supernatants, in addition to the expression induction of molecules related to adhesion and inflammation processes. rACLF and rACLH were not cytotoxic to human fibroblasts. On the other hand, both proteins caused decrease of cell viability, changes in morphology, and detachment of HeLa cells. On human fibroblasts, rACLF modulated the expression of chemokines CXC, IL-8 and GRO, and chemokine CC, MCP1. The supernatant of human fibroblasts and HeLa cells were analyzed for MMP-2 (gelatinase-A) secretion. No difference was observed after 48 h incubation with rACLF and controls. rACLF presented hydrolytic activity on extracellular matrix proteins, such as laminin, fibronectin, collagen IV, and thrombospondin. Furthermore, hydrolytic activity on insulin β chain peptide was tested and compared to rACLH activity. rACLF was shown to be more efficient than rACLH on this substrate. In conclusion, the results of this study increased the knowledge on the protein effects on different cell lines and open up perspectives for new studies concerning signaling and regulation mechanisms affected by this protein activity.eng
dc.description.sponsorshipUniversidade Federal de Minas Gerais
dc.formatapplication/pdfpor
dc.languageporpor
dc.publisherUniversidade Federal de São Carlospor
dc.rightsAcesso Abertopor
dc.subjectProteínaspor
dc.subjectMatriz extracelularpor
dc.subjectCélulas - mortepor
dc.subjectCitocinapor
dc.titleEfeito da rACLF, uma metalopeptidase recombinante da peçonha de Agkistrodon contortrix laticinctus, na viabilidade celular, expressão de citocinas e degradação de proteínas da matriz extracelular.por
dc.typeTesepor
dc.contributor.advisor1Araújo, Heloísa Sobreiro Selistre de
dc.contributor.advisor1Latteshttp://genos.cnpq.br:12010/dwlattes/owa/prc_imp_cv_int?f_cod=K4787059Y2por
dc.description.resumoA ACLF é uma metalopeptidase da peçonha da serpente Agkistrondon contortrix laticinctus. A ACLF é sintetizada na forma de zimogênio (pró-ACLF) com 412 aminoácidos, enquanto a sua forma ativa possui 222 aminoácidos. A fase aberta de leitura que codifica para a peptidase foi isolada (de uma biblioteca de cDNA feita a partir da glândula venenífera da serpente) e caracterizada. Este trabalho apresenta os efeitos da rACLF em células endoteliais (HUVECs), tumorais (HeLa, MDA-MB-231 e MCF-7) e não-tumorais (fibroblastos), bem como a atividade proteolítica da enzima sobre proteínas da matriz extracelular, como colágeno, fibronectina, laminina e trombospondina. Nossos resultados demonstraram que a rACLF inibiu a apoptose induzida por privação de soro fetal bovino em HUVECs, mas não foi capaz de induzir a proliferação celular. A rACLF apresentou efeito direto sobre as células endoteliais, aumentando a liberação de IL-8, além de induzir a expressão de moléculas envolvidas na adesão celular e reposta inflamatória. A rACLF e a rACLH não foram citotóxicas para fibroblastos humanos. Por outro lado as duas enzimas estudadas causaram redução na viabilidade alteração na morfologia e desgrudamento em células HeLa. Em fibroblastos, a rACLF modulou a expressão das quimoquinas CXC, IL-8 e GRO e CC, MCP1. Nos sobrenadantes de fibroblastos e HeLa incubados com rACLF por 48 h não foi observada diferença na secreção de MMP-2 (gelatinase-A). A rACLF apresentou atividade sobre proteínas da matriz extracelular, como laminina, fibronectina, colágeno IV e trombospondina. A rACLF também hidrolisou alguns substratos fluorogênicos e foi mais eficiente na hidrólise do substrato correspondente ao peptídeo central da cadeia β da insulina, quando comparada com a rACLH .Os resultados deste trabalho contribuíram para melhor entendimento dos efeitos da proteína estudada sobre diferentes linhagens celulares e abrem perspectivas para novos estudos voltados à elucidação dos mecanismos de regulação e sinalização afetados pela atividade da proteína.por
dc.publisher.countryBRpor
dc.publisher.initialsUFSCarpor
dc.publisher.programPrograma Interinstitucional de Pós-Graduação em Ciências Fisiológicas - PIPGCFpor
dc.subject.cnpqCIENCIAS BIOLOGICAS::FISIOLOGIApor
dc.contributor.authorlatteshttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/index.jsppor


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