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Caracterização da antigenicidade e do efeito protetor em modelo murino de proteínas recombinantes de Erysipelothrix rhusiopathiae candidatas a antígenos vacinais
dc.contributor.author | Fuzissaki, Yuri Nakau | |
dc.date.accessioned | 2020-12-08T09:11:58Z | |
dc.date.available | 2020-12-08T09:11:58Z | |
dc.date.issued | 2020-02-18 | |
dc.identifier.citation | FUZISSAKI, Yuri Nakau. Caracterização da antigenicidade e do efeito protetor em modelo murino de proteínas recombinantes de Erysipelothrix rhusiopathiae candidatas a antígenos vacinais. 2020. Dissertação (Mestrado em Genética Evolutiva e Biologia Molecular) – Universidade Federal de São Carlos, São Carlos, 2020. Disponível em: https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/13536. | * |
dc.identifier.uri | https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/13536 | |
dc.description.abstract | Erysipelothrix rhusiopathiae is a gram-positive, bacilliform, and encapsulated bacterium that causes swine erysipelas, a disease characterized by skin lesions and other symptoms such as septicemia, arthritis, and endocarditis in the affected animals. Vaccines from attenuated or inactive E. rhusiopathiae cells are available on the market, but they are not so effective to overcome the acute form of the disease. Also, they can aggravate the symptoms of the chronic form. E. rhusiopathiae extracellular proteins were detected as potentially antigenic. It has previously been cloned the coding sequences for 11 genes related to these proteins in the pJET1.2/blunt vector and pET28 expression vector. The present work aims to perform heterologous expression of four of these proteins, named P1, P3, P6, and P7, for functional characterization of their in vitro antigenicity and protection character against E. rhusiopathiae in a murine model. For this, the following was performed: production of recombinant forms of P1 and P7 proteins in Escherichia coli Rosetta strain (DE3) and of P3 and P6 proteins in BL21 (DE3) strain; purification of the four recombinant proteins by affinity and molecular exclusion chromatography. All recombinant proteins were successfully expressed in E. coli and were functionally evaluated for: in vitro antigenicity by Western blot and ELISA, using sera from swine immunized with the available commercial vaccine; protective effect in mice by challenging with E. rhusiopathiae and monitoring of the animals survival; in vitro antigenicity by ELISA using sera from mice immunized with recombinant proteins and challenged with E. rhusiopathiae. The results demonstrated that all proteins are antigenic in pigs and mice, but only P7 protein provides survival for at least one of the six challenged mice. This work leads to the conclusion that the immunoproteomic analysis was a useful tool for the discovery of new antigens of E. rhusiopathiae, however, the antigenic proteins have limited protection effect for the proposals of effective new vaccines. New studies need to be carried out in order to verify whether the protective effect of the recombinant proteins studied here can be enhanced by changing the dosage or administration routes, or even by a combination of P7 protein with other antigenic proteins for a greater protective efficacy against E. rhusiopathiae. | eng |
dc.description.sponsorship | Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) | por |
dc.language.iso | por | por |
dc.publisher | Universidade Federal de São Carlos | por |
dc.rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil | * |
dc.rights.uri | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/ | * |
dc.subject | Erysipelothrix rhusiopathiae | por |
dc.subject | Erisipela suína | por |
dc.subject | Antigenicidade | por |
dc.subject | Proteína recombinante | por |
dc.subject | Vacina recombinante | por |
dc.subject | Imunização | por |
dc.subject | Swine erisipela | eng |
dc.subject | Antigenicity | eng |
dc.subject | Recombinant protein | eng |
dc.subject | Recombinant vaccine | eng |
dc.subject | Immunization | eng |
dc.title | Caracterização da antigenicidade e do efeito protetor em modelo murino de proteínas recombinantes de Erysipelothrix rhusiopathiae candidatas a antígenos vacinais | por |
dc.title.alternative | Characterization of antigenicity and protective effect of recombinant proteins from Erysipelothrix rhusiopathiae for vaccine antigens | eng |
dc.type | Dissertação | por |
dc.contributor.advisor1 | Novo-Mansur, Maria Teresa Marques | |
dc.contributor.advisor1Lattes | http://lattes.cnpq.br/1198926223396748 | por |
dc.contributor.advisor-co1 | Anibal, Fernanda de Freitas | |
dc.contributor.advisor-co1Lattes | http://lattes.cnpq.br/4918261968772806 | por |
dc.description.resumo | Erysipelothrix rhusiopathiae é uma bactéria Gram positiva, baciliforme e encapsulada, que causa erisipela suína, doença caracterizada por lesões cutâneas e outros sinais como septicemia, artrites e endocardites nos animais afetados. Vacinas a partir de células atenuadas ou inativadas de E. rhusiopathiae estão disponíveis no mercado, porém não são tão eficazes no combate à forma aguda da doença, além de agravarem sintomas da forma crônica. Proteínas extracelulares de E. rhusiopathiae foram detectadas como sendo potencialmente antigênicas, tendo sido clonadas as sequências codificadoras de 11 genes correspondentes a essas proteínas em vetor de propagação pJET1.2/blunt e de expressão pET28. O presente trabalho visa dar continuidade a este trabalho anterior pela expressão heteróloga de quatro dessas proteínas, denominadas P1, P3, P6 e P7, para a caracterização funcional das mesmas quanto à antigenicidade in vitro e ao seu caráter protetor contra E. rhusiopathiae em modelo murino. Para isto, foram realizadas: produção em Escherichia coli das proteínas P1 e P7 na forma recombinante em linhagem Rosetta (DE3) e das proteínas P3 e P6 em linhagem BL21 (DE3); purificação das proteínas recombinantes por cromatografias de afinidade e exclusão molecular. Todas as proteínas recombinantes foram expressas com sucesso em E. coli e foram avaliadas funcionalmente quanto à (ao): antigenicidade in vitro por Western blot e ELISA utilizando soro de suínos previamente imunizados com a vacina comercial disponível; efeito protetor em camundongos, os quais foram desafiados com E. rhusiopathiae e monitorados quanto à sobrevivência; antigenicidade in vitro por ELISA utilizando soros de camundongos imunizados com as proteínas recombinantes e desafiados com E. rhusiopathiae. Os resultados demonstraram que todas as proteínas foram antigênicas em suínos e camundongos, porém somente a proteína P7 proporcionou sobrevida para ao menos um dos seis camundongos desafiados. Este trabalho nos leva a concluir que a análise imunoproteômica foi uma ferramenta eficaz para a descoberta de novos potenciais antígenos de E. rhusiopathiae, no entanto as proteínas antigências possuem efeito protetor limitado para fins de proposição de novas vacinas. Novos estudos precisam ser realizados a fim de se verificar se o efeito protetor das proteínas recombinantes aqui estudadas pode ser mais eficaz por modificação da dosagem e/ou via de administração, ou ainda, se a imunização combinada da proteína P7 com outras proteínas antigênicas poderia apresentar maior eficácia protetiva contra E. rhusiopathiae. | por |
dc.publisher.initials | UFSCar | por |
dc.publisher.program | Programa de Pós-Graduação em Genética Evolutiva e Biologia Molecular - PPGGEv | por |
dc.subject.cnpq | CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA::BIOLOGIA MOLECULAR | por |
dc.subject.cnpq | CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA | por |
dc.subject.cnpq | CIENCIAS BIOLOGICAS | por |
dc.description.sponsorshipId | CAPES: Código de Financiamento 001 | por |
dc.publisher.address | Câmpus São Carlos | por |
dc.contributor.authorlattes | http://lattes.cnpq.br/4331733759844179 | por |