dc.contributor.author | Fuzissaki, Yuri Nakau | |
dc.date.accessioned | 2020-12-08T09:11:58Z | |
dc.date.available | 2020-12-08T09:11:58Z | |
dc.date.issued | 2020-02-18 | |
dc.identifier.citation | FUZISSAKI, Yuri Nakau. Caracterização da antigenicidade e do efeito protetor em modelo murino de proteínas recombinantes de Erysipelothrix rhusiopathiae candidatas a antígenos vacinais. 2020. Dissertação (Mestrado em Genética Evolutiva e Biologia Molecular) – Universidade Federal de São Carlos, São Carlos, 2020. Disponível em: https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/13536. | * |
dc.identifier.uri | https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/13536 | |
dc.description.abstract | Erysipelothrix rhusiopathiae is a gram-positive, bacilliform, and encapsulated bacterium that
causes swine erysipelas, a disease characterized by skin lesions and other symptoms such
as septicemia, arthritis, and endocarditis in the affected animals. Vaccines from attenuated or
inactive E. rhusiopathiae cells are available on the market, but they are not so effective to
overcome the acute form of the disease. Also, they can aggravate the symptoms of the
chronic form. E. rhusiopathiae extracellular proteins were detected as potentially antigenic. It
has previously been cloned the coding sequences for 11 genes related to these proteins in
the pJET1.2/blunt vector and pET28 expression vector. The present work aims to perform
heterologous expression of four of these proteins, named P1, P3, P6, and P7, for functional
characterization of their in vitro antigenicity and protection character against E. rhusiopathiae
in a murine model. For this, the following was performed: production of recombinant forms of
P1 and P7 proteins in Escherichia coli Rosetta strain (DE3) and of P3 and P6 proteins in
BL21 (DE3) strain; purification of the four recombinant proteins by affinity and molecular
exclusion chromatography. All recombinant proteins were successfully expressed in E. coli
and were functionally evaluated for: in vitro antigenicity by Western blot and ELISA, using
sera from swine immunized with the available commercial vaccine; protective effect in mice
by challenging with E. rhusiopathiae and monitoring of the animals survival; in vitro
antigenicity by ELISA using sera from mice immunized with recombinant proteins and
challenged with E. rhusiopathiae. The results demonstrated that all proteins are antigenic in
pigs and mice, but only P7 protein provides survival for at least one of the six challenged
mice. This work leads to the conclusion that the immunoproteomic analysis was a useful tool
for the discovery of new antigens of E. rhusiopathiae, however, the antigenic proteins have
limited protection effect for the proposals of effective new vaccines. New studies need to be
carried out in order to verify whether the protective effect of the recombinant proteins studied
here can be enhanced by changing the dosage or administration routes, or even by a
combination of P7 protein with other antigenic proteins for a greater protective efficacy
against E. rhusiopathiae. | eng |
dc.description.sponsorship | Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) | por |
dc.language.iso | por | por |
dc.publisher | Universidade Federal de São Carlos | por |
dc.rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil | * |
dc.rights.uri | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/ | * |
dc.subject | Erysipelothrix rhusiopathiae | por |
dc.subject | Erisipela suína | por |
dc.subject | Antigenicidade | por |
dc.subject | Proteína recombinante | por |
dc.subject | Vacina recombinante | por |
dc.subject | Imunização | por |
dc.subject | Swine erisipela | eng |
dc.subject | Antigenicity | eng |
dc.subject | Recombinant protein | eng |
dc.subject | Recombinant vaccine | eng |
dc.subject | Immunization | eng |
dc.title | Caracterização da antigenicidade e do efeito protetor em modelo murino de proteínas recombinantes de Erysipelothrix rhusiopathiae candidatas a antígenos vacinais | por |
dc.title.alternative | Characterization of antigenicity and protective effect of recombinant proteins from Erysipelothrix rhusiopathiae for vaccine antigens | eng |
dc.type | Dissertação | por |
dc.contributor.advisor1 | Novo-Mansur, Maria Teresa Marques | |
dc.contributor.advisor1Lattes | http://lattes.cnpq.br/1198926223396748 | por |
dc.contributor.advisor-co1 | Anibal, Fernanda de Freitas | |
dc.contributor.advisor-co1Lattes | http://lattes.cnpq.br/4918261968772806 | por |
dc.description.resumo | Erysipelothrix rhusiopathiae é uma bactéria Gram positiva, baciliforme e encapsulada, que
causa erisipela suína, doença caracterizada por lesões cutâneas e outros sinais como
septicemia, artrites e endocardites nos animais afetados. Vacinas a partir de células
atenuadas ou inativadas de E. rhusiopathiae estão disponíveis no mercado, porém não são
tão eficazes no combate à forma aguda da doença, além de agravarem sintomas da forma
crônica. Proteínas extracelulares de E. rhusiopathiae foram detectadas como sendo
potencialmente antigênicas, tendo sido clonadas as sequências codificadoras de 11 genes
correspondentes a essas proteínas em vetor de propagação pJET1.2/blunt e de expressão
pET28. O presente trabalho visa dar continuidade a este trabalho anterior pela expressão
heteróloga de quatro dessas proteínas, denominadas P1, P3, P6 e P7, para a
caracterização funcional das mesmas quanto à antigenicidade in vitro e ao seu caráter
protetor contra E. rhusiopathiae em modelo murino. Para isto, foram realizadas: produção
em Escherichia coli das proteínas P1 e P7 na forma recombinante em linhagem Rosetta
(DE3) e das proteínas P3 e P6 em linhagem BL21 (DE3); purificação das proteínas
recombinantes por cromatografias de afinidade e exclusão molecular. Todas as proteínas
recombinantes foram expressas com sucesso em E. coli e foram avaliadas funcionalmente
quanto à (ao): antigenicidade in vitro por Western blot e ELISA utilizando soro de suínos
previamente imunizados com a vacina comercial disponível; efeito protetor em
camundongos, os quais foram desafiados com E. rhusiopathiae e monitorados quanto à
sobrevivência; antigenicidade in vitro por ELISA utilizando soros de camundongos
imunizados com as proteínas recombinantes e desafiados com E. rhusiopathiae. Os
resultados demonstraram que todas as proteínas foram antigênicas em suínos e
camundongos, porém somente a proteína P7 proporcionou sobrevida para ao menos um
dos seis camundongos desafiados. Este trabalho nos leva a concluir que a análise
imunoproteômica foi uma ferramenta eficaz para a descoberta de novos potenciais
antígenos de E. rhusiopathiae, no entanto as proteínas antigências possuem efeito protetor
limitado para fins de proposição de novas vacinas. Novos estudos precisam ser realizados
a fim de se verificar se o efeito protetor das proteínas recombinantes aqui estudadas pode
ser mais eficaz por modificação da dosagem e/ou via de administração, ou ainda, se a
imunização combinada da proteína P7 com outras proteínas antigênicas poderia apresentar
maior eficácia protetiva contra E. rhusiopathiae. | por |
dc.publisher.initials | UFSCar | por |
dc.publisher.program | Programa de Pós-Graduação em Genética Evolutiva e Biologia Molecular - PPGGEv | por |
dc.subject.cnpq | CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA::BIOLOGIA MOLECULAR | por |
dc.subject.cnpq | CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA | por |
dc.subject.cnpq | CIENCIAS BIOLOGICAS | por |
dc.description.sponsorshipId | CAPES: Código de Financiamento 001 | por |
dc.publisher.address | Câmpus São Carlos | por |
dc.contributor.authorlattes | http://lattes.cnpq.br/4331733759844179 | por |