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dc.contributor.authorBegnami, Isabela dos Santos
dc.date.accessioned2021-01-06T16:41:09Z
dc.date.available2021-01-06T16:41:09Z
dc.date.issued2020-12-18
dc.identifier.citationBEGNAMI, Isabela dos Santos. Produção e avaliação de anticorpo policlonal anti-Leishmania para aplicação em diagnóstico. 2020. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Biotecnologia) – Universidade Federal de São Carlos, São Carlos, 2020. Disponível em: https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/13624.*
dc.identifier.urihttps://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/13624
dc.description.abstractLeishmania is a protozoa genus with several species of intracellular parasites that cause diseases called leishmaniasis, divided into: visceral (VL), the most serious form that affects internal organs and can lead to death, or cutaneous (CL), attacking the skin or mucous membranes with ulcers. These diseases belong to the group of neglected diseases, because they mostly infect poorer populations and are not a priority for health services, with their specific methods of treatment and diagnosis not reaching the places with the highest number of cases. To solve the problem and increase specificity and sensitivity, we can use specific recombinant purifieds, such as the recombinant protein K39 (kinesin-like protein K39), in the tests. Therefore, the objective of the work was to produce anti-leishmania antibodies from K39 aiming at the development of an immunoenzymatic test. The polyclonal anti-leishmania antibody was produced, qualitatively evaluated by SDS-PAGE polyacrylamide gel electrophoresis, transferred to a nitrocellulose membrane for an Immunoblotting Assay and applied to an indirect ELISA immunoassay for sensitivity analysis. In the electrophoretic profile was possible to observe the presence of two bands, one short chain (25kDa) and one long chain (53kDa), in addition to albumin contamination. The 1: 1000 dilution sample was stronger than the 1: 5000 sample. Different dilutions were tested in Immunoblotting (1:25, 1:50, 1: 100, 1: 250 and 1: 500) and bands were seen in all of them, with the 1: 500 antigen being the most evident, which confirms the reactivity of the antibody produced. For being polyclonal, nonspecific bands were also found. The optical density of the ELISA was measured in duplicate and standardized for analysis, generating satisfactory results for the concentrations of 1: 5000 and 1: 1000, even with this having the last lower result. Consequantly, the K39 antigen obtained values that enable its use in diagnoses for leishmaniasis.por
dc.description.sponsorshipNão recebi financiamentopor
dc.language.isoporpor
dc.publisherUniversidade Federal de São Carlospor
dc.rightsAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil*
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/*
dc.subjectLeishmaniosepor
dc.subjectAnticorpopor
dc.subjectDiagnósticopor
dc.subjectK39por
dc.subjectLeishmaniasispor
dc.subjectDiagnosticpor
dc.subjectAntibodypor
dc.titleProdução e avaliação de anticorpo policlonal anti-Leishmania para aplicação em diagnósticopor
dc.title.alternativeProduction and evaluation of anti-Leishmania polyclonal antibody for diagnostic applicationpor
dc.typeTCCpor
dc.contributor.advisor1Carrilho, Emanuel
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/9157872297410868por
dc.contributor.advisor-co1Anibal, Fernanda de Freitas
dc.contributor.advisor-co1Latteshttp://lattes.cnpq.br/4918261968772806por
dc.description.resumoA Leishmania é um gênero de protozoários com várias espécies de parasitas intracelulares que podem causar as doenças chamadas leishmanioses, divididas em: visceral (LV), a forma mais grave que afeta os órgãos internos e pode levar a óbito, ou cutânea (LC), acometendo a pele ou as mucosas com úlceras. Essas enfermidades entram no grupo de doenças chamadas negligenciadas, pois infectam majoritariamente populações mais pobres e não são prioridade para os serviços de saúde, com seus métodos específicos de tratamento e diagnóstico não chegando aos locais com maior número de casos. Para solucionar o problema e aumentar a especificidade e a sensibilidade, podemos utilizar purificados recombinantes específicos, como a proteína recombinante K39 (kinesin-like protein K39), nos testes. Portanto, o objetivo do trabalho foi produzir anticorpos anti-leishmania a partir K39 visando o desenvolvimento de um teste imunoenzimático. O anticorpo policlonal anti-leishmania foi produzido, avaliado qualitativamente por eletroforese em gel de poliacrilamida SDS-PAGE, transferido para uma membrana de nitrocelulose para um Ensaio de Immunoblotting e submetido ao imunoensaio de ELISA indireto para a análise de sensibilidade. No perfil eletroforético foi possível observar a presença de duas bandas, uma de cadeia curta (25kDa) e uma de longa (53kDa), além de uma contaminação por albumina. A amostra de diluição 1:1000 ficou mais forte do que a de 1:5000. Diferentes diluições foram testadas no Immunoblotting (1:25, 1:50, 1:100, 1:250 e 1:500) e bandas foram visualizadas em todas, sendo a antigênica de 1:500 a mais evidente, o que confirma a reatividade do anticorpo produzido. Por ser policlonal, bandas inespecíficas também foram constatadas. A densidade óptica do ELISA foi medida em duplicata e padronizada para análise, gerando resultados satisfatórios para as concentrações de 1:5000 e 1:1000, mesmo com este tendo o ultimo resultado menor. Assim, o antígeno K39 obteve valores que possibilitam seu uso em diagnósticos para leishmaniose.por
dc.publisher.initialsUFSCarpor
dc.subject.cnpqCIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA::IMUNOLOGIA APLICADApor
dc.publisher.addressCâmpus São Carlospor
dc.contributor.authorlatteshttp://lattes.cnpq.br/9385921945740640por
dc.publisher.courseBiotecnologia - Biotecpor


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