dc.contributor.author | Fragelli, Bruna Dias de Lima | |
dc.date.accessioned | 2023-02-03T11:25:44Z | |
dc.date.available | 2023-02-03T11:25:44Z | |
dc.date.issued | 2022-12-19 | |
dc.identifier.citation | FRAGELLI, Bruna Dias de Lima. Imunoterapia com IL-2 e TRAIL expressas por Salmonella recombinante contra o câncer de bexiga. 2022. Tese (Doutorado em Genética Evolutiva e Biologia Molecular) – Universidade Federal de São Carlos, São Carlos, 2022. Disponível em: https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/17334. | * |
dc.identifier.uri | https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/17334 | |
dc.description.abstract | IL-2 and TRAIL are therapeutic agents known for their antitumor role, but they can be rapidly
cleared by the body or be toxic, compromising their function. To reverse this impasse, the synthesis
of these agents by living bacteria directly in the tumor is a viable approach, due to the preference
of bacteria to infect tumor cells. This happens due to the high nutrient grid in this
microenvironment and escape from the protective action of immune cells since solid tumors are
ischemic and have regions of hypoxia. In this context, Salmonella represents a promising live
vector for delivering molecules with an antitumor role. In this context, Salmonella represents a
promising live vector for delivering molecules with an antitumor role. This study investigated the
effects of IL-2, TRAIL and MIX of proteins expressed by recombinant Salmonella, strain SL3261,
which contains a plasmid for the gene sequence of IL-2 and TRAIL, in bladder tumor cells in in
vitro and in vivo models. The murine MB49 and human RT4 bladder cancer cell lines and
C57BL/6 female mice were used. In in vitro tests, the cells were exposed for 24 and 48 hours to
these proteins and the analyzes were performed by flow cytometry, ELISA, dyes and fluorescent
antibodies to detect several cellular parameters: viability, morphology, recovery, nitric oxide
synthesis, secretion of LDH, production of inflammatory cytokines and apoptosis. For in vivo test,
a bladder tumor was induced in female mice by inoculation of MB49 cells followed by intravesical
treatment, with subsequent analysis of survival, bladder weight, tumor regression, cell profile,
cytokine release and biodistribution of bacterial strains. The data obtained indicate that both agents
are cytotoxic for the tumor cell, as they cause a decrease in cell viability, modification of its own
morphology and induction of apoptosis in both MB49 and RT4. This effect is caused by the
activation of the enzyme iNOS by IL-2, which induces the synthesis of nitric oxide with
consequent activation of genes that determine DNA degradation, and by the activation of the
Caspase family by TRAIL, leading to apoptosis. In the in vivo tests, however, there was marked
tumor regression, activation of the immune response due to the action of proteins, cell recruitment
against tumor cells without causing damage to healthy tissues with an effect only on the tumor.
Therefore, IL-2 and TRAIL expressed and conveyed by SL3261 have promising potential in the
therapy of bladder cancer and that the proteins present synergism and that the MIX is more
effective. | eng |
dc.description.sponsorship | Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) | por |
dc.language.iso | por | por |
dc.publisher | Universidade Federal de São Carlos | por |
dc.rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil | * |
dc.rights.uri | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/ | * |
dc.subject | SL3261 | por |
dc.subject | IL-2 | por |
dc.subject | TRAIL | por |
dc.subject | Câncer de bexiga | por |
dc.subject | Imunoterapia | por |
dc.subject | Vetor vivo | por |
dc.subject | Bladder cancer | eng |
dc.subject | Immunotherapy | eng |
dc.subject | Live vector | eng |
dc.title | Imunoterapia com IL-2 e TRAIL expressas por Salmonella recombinante contra o câncer de bexiga | por |
dc.title.alternative | Immunotherapy with IL-2 and TRAIL expressed by recombinant Salmonella against bladder cancer | eng |
dc.type | Tese | por |
dc.contributor.advisor1 | Anibal, Fernanda de Freitas | |
dc.contributor.advisor1Lattes | http://lattes.cnpq.br/4918261968772806 | por |
dc.description.resumo | IL-2 e TRAIL são agentes terapêuticos conhecidos por seu papel antitumoral, mas podem ser
depurados rapidamente pelo organismo ou serem tóxicos, comprometendo sua função. Para
reverter esse impasse, a síntese desses agentes por bactérias vivas diretamente no tumor é uma
abordagem viável, devido à preferência das bactérias em infectar as células tumorais. Isso acontece
devido à alta grade de nutrientes neste microambiente e fuga da ação protetora das células
imunológicas, já que os tumores sólidos são isquêmicos e possuem regiões de hipóxia. Nesse
contexto, Salmonella representa um vetor vivo promissor para entrega de moléculas com papel
antitumoral. Este estudo investigou os efeitos de IL-2, TRAIL e MIX das proteínas expressas por
Salmonella recombinante, linhagem SL3261, que contém plasmídeo para a sequência gênica de
IL-2 e TRAIL, em células tumorais de bexiga no modelo in vitro e in vivo. Foram utilizadas as
linhagens celulares de câncer de bexiga murina MB49 e humana RT4 e camundongos fêmea
C57BL/6. Nos ensaios in vitro as células foram expostas por 24 e 48 horas a essas proteínas e as
análises foram realizadas por citometria de fluxo, ELISA, corantes e anticorpos fluorescentes para
detectar diversos parâmetros celulares: viabilidade, morfologia, recuperação, síntese de óxido
nítrico, secreção de LDH, produção de citocinas inflamatórias e apoptose. Para o ensaio in vivo
um tumor de bexiga foi induzido em camundongos fêmea pela inoculação de células MB49
seguida por tratamento intravesical, com posterior análise de sobrevida, peso das bexigas,
regressão tumoral, perfil celular, liberação de citocinas e biodistribuição das linhagens bacterianas.
Os dados obtidos apontam que ambos os agentes são citotóxicos para a célula tumoral, pois causam
diminuição da viabilidade celular, modificação de sua morfologia própria e indução de apoptose
tanto em MB49 quanto em RT4. Esse efeito é causado pela ativação da enzima iNOS pela IL-2,
que induz a síntese de óxido nítrico com consequente ativação de genes que determinam à
degradação do DNA, e pela ativação da família Caspase por TRAIL, levando à apoptose. Já nos
testes in vivo, houve acentuada regressão tumoral, ativação de resposta imunológica devido a ação
das proteínas, recrutamento celular contra células tumorais sem causar danos em tecidos saudáveis
com efeito somente no tumor. Portanto, IL-2 e TRAIL expressas e veiculadas por SL3261
apresentam potencial promissor na terapia do câncer de bexiga, sendo que as proteínas apresentam
sinergismo e que o MIX é mais efetivo. | por |
dc.publisher.initials | UFSCar | por |
dc.publisher.program | Programa de Pós-Graduação em Genética Evolutiva e Biologia Molecular - PPGGEv | por |
dc.subject.cnpq | CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA | por |
dc.description.sponsorshipId | CAPES: Código de financiamento 001 | por |
dc.publisher.address | Câmpus São Carlos | por |
dc.contributor.authorlattes | http://lattes.cnpq.br/0149534142066009 | por |