dc.contributor.author | Fan, Karina | |
dc.date.accessioned | 2023-04-06T18:21:25Z | |
dc.date.available | 2023-04-06T18:21:25Z | |
dc.date.issued | 2023-03-21 | |
dc.identifier.citation | FAN, Karina. Avaliação do desenvolvimento do inseto Diaphorina Citri através da alimentação em dieta artificial contendo Cistatinas de citros. 2023. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Biotecnologia) – Universidade Federal de São Carlos, São Carlos, 2023. Disponível em: https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/17653. | * |
dc.identifier.uri | https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/17653 | |
dc.description.abstract | Brazil is an essentially agricultural country, being highlighted in
citriculture worldwide, especially in the production and export of citrus in natura and concentrated juice.
Despite its economic relevance, the crops are severely affected by pests and pathogens, many of which
have few effective control measures. Huanglongbing (HLB), known as greening in some countries, is
considered the most serious and destructive disease of citrus, affecting growth, ripening, and fruit
morphology. The causal agents of HLB are phloem-limited bacteria of the species Candidatus
Liberibacter spp. that are transmitted by the Asian citrus psyllid, Diaphorina citri Kuwayama
(Hemiptera: Liviidae). As a consequence of HLB, the fruits are characterized by low juice content and
high acidity, which make their commercialization unfeasible and lead to serious economic losses.
Currently, HLB control is done by monitoring seedlings and using chemicals, but it is a laborious method
and not always effective, and may generate insect resistance. Thus, new technologies are needed, and
the development of plants overexpressing inhibitors of cysteine-peptidases (cystatins) is an interesting
alternative. Hemiptera use several proteases in their digestive process, mainly of the cysteine-peptidase
type and, therefore, the interaction between cystatins and cysteine-peptidases can affect the growth and
development of pest insects. Thus, this study aimed the heterologous expression of recombinant
cystatins from Citrus clementina (CclemCPI-1 and CclemCPI-3) and Citrus sinensis (CsinCPI-2) in
Escherichia coli and purification by affinity chromatography. These purified proteins were used to
evaluate the inhibitory activity in artificial diet for D. citri, at concentrations of 1 and 2 mg/mL, in order
to observe any effect on the psyllid development. In the tests performed in artificial diet containing the
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purified proteins, a considerable mortality rate was observed for CclemCPI-1 protein, with 26.97% at 1
mg/mL and 48% at 2 mg/mL. In the assays with CclemCPI-3 and CsinCPI-2 proteins, mortality of 6
and 8%, respectively, was observed at the highest concentration. These data suggest a possible
interference in insect development. However, further tests will be necessary to standardize the results,
as well as to investigate the cystatin-peptidase interaction and evaluate for dose-dependence | eng |
dc.description.sponsorship | Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) | por |
dc.language.iso | por | por |
dc.publisher | Universidade Federal de São Carlos | por |
dc.rights | Attribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil | * |
dc.rights.uri | http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/ | * |
dc.subject | Citros | por |
dc.subject | HLB | por |
dc.subject | Diaphorina citri | por |
dc.subject | Cistatina | por |
dc.subject | Dieta artificial | por |
dc.subject | Citrus | eng |
dc.subject | Huanglongbing | eng |
dc.subject | Cystatin | eng |
dc.subject | Artificial diet | eng |
dc.title | Avaliação do desenvolvimento do inseto Diaphorina Citri através da alimentação em dieta artificial contendo Cistatinas de citros | por |
dc.title.alternative | Evaluation of insect Diaphorina citri development feeding by artificial diets containing recombinant cystatins from Citrus | eng |
dc.type | TCC | por |
dc.contributor.advisor1 | Fuentes, Andrea Soares da Costa | |
dc.contributor.advisor1Lattes | http://lattes.cnpq.br/2426157257540389 | por |
dc.description.resumo | O Brasil é um país essencialmente agrícola, sendo destaque na citricultura
mundial, principalmente na produção e exportação de citros in natura e suco concentrado. Apesar da
relevância econômica, as plantações são gravemente afetadas por pragas e patógenos, muitos dos quais
possuem poucas medidas de controle efetivas. O Huanglongbing (HLB), conhecido como greening em
alguns países, é considerado a doença mais grave e destrutiva do gênero citros, afetando o crescimento,
amadurecimento e morfologia dos frutos. Os agentes causais do HLB são bactérias restritas ao floema
da espécie Candidatus Liberibacter spp., que são transmitidas pelo psilídeo asiático dos citros,
Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Liviidae). Como consequência do HLB, os frutos apresentam
baixo teor de suco e alta acidez, tornando inviável sua comercialização e resultando em sérias perdas
econômicas. Atualmente, o controle do HLB se dá pelo monitoramento das mudas e uso de produtos
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químicos, porém é um método trabalhoso e nem sempre eficaz, podendo gerar resistência dos insetos.
Dessa forma, novas tecnologias são necessárias, sendo o desenvolvimento de plantas superexpressando
inibidores de cisteíno-peptidases (cistatinas) uma alternativa interessante. Os hemípteros utilizam
diversas proteases em seu processo digestivo, principalmente do tipo cisteino-peptidase e, portanto, a
interação entre cistatinas e cisteíno-peptidases pode afetar o crescimento e desenvolvimento dos insetospraga. Assim, este trabalho teve como objetivo a expressão heteróloga de cistatinas recombinantes de
Citrus clementina (CclemCPI-1 e CclemCPI-3) e Citrus sinensis (CsinCPI-2) em Escherichia coli e
purificação por cromatografia de afinidade. Essas proteínas purificadas foram utilizadas para avaliação
da atividade inibitória em dieta artificial para D. citri, nas concentrações de 1 e 2 mg/mL, visando
observar algum efeito no desenvolvimento do psilídeo. Nos ensaios realizados em dieta artificial
contendo as proteínas purificadas foi observada mortalidade considerável para a proteína CclemCPI-1,
com 26,97% na dosagem de 1 mg/mL e 48% na dosagem de 2 mg/mL. Nos ensaios com as proteínas
CclemCPI-3 e CsinCPI-2 foi observada uma mortalidade de 6 e 8%, respectivamente, na maior
concentração. Esses dados sugerem uma possível interferência no desenvolvimento do inseto.
Entretanto, será necessário a realização de novos testes para padronização dos resultados, assim como
investigar a interação cistatina-peptidase e avaliar por dose-dependência | por |
dc.publisher.initials | UFSCar | por |
dc.subject.cnpq | CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA::BIOLOGIA MOLECULAR | por |
dc.description.sponsorshipId | CNPq 128507/2020-9 e | por |
dc.description.sponsorshipId | FAPESP 2021/09947-7 | por |
dc.publisher.address | Câmpus São Carlos | por |
dc.contributor.authorlattes | http://lattes.cnpq.br/3714136505392474 | por |
dc.publisher.course | Biotecnologia - Biotec | por |