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dc.contributor.authorDeus, Isabela Giacomeli de
dc.date.accessioned2023-10-24T12:44:59Z
dc.date.available2023-10-24T12:44:59Z
dc.date.issued2023-08-21
dc.identifier.citationDEUS, Isabela Giacomeli de. Expressão Recombinante de uma Miraculina de Citrus em Pichia pastoris e em Escherichia coli. 2023. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Ciências Biológicas) – Universidade Federal de São Carlos, São Carlos, 2023. Disponível em: https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/18807.*
dc.identifier.urihttps://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/18807
dc.description.abstractThe high consumption of sugar in Brazil and in the world result in drastic consequences for human health, causing numerous diseases. In the search for alternatives to reduce sugar consumption, several studies have emerged related to the development of caloric and non-caloric sweeteners, of natural or artificial origin. Among the natural compounds there is a group of proteins that have the property of modifying the flavor of food. Within this class of molecules, there is the protein called miraculin, from the plant Richardella dulcifica, native to Africa, which has the property of modifying the acidic taste of food into sweet. Due to this potential, there are reports of several tests carried out in an attempt to produce miraculin through recombinant expression in other organisms. However, other studies have discovered the existence of miraculin-like proteins in other plants, although there is still no description of miraculin-like proteins with such property. On the other hand, in silico analyzes allowed finding in Citrus paradisi a protein with a gene sequence with high similarity to that found in the original miraculin. Therefore, the characterization of this protein and the exploration of its potential ability to modify flavor may result in non-caloric alternatives to sweeten acidic foods, thus contributing to an improvement in human health. Therefore, the objective was the recombinant expression of a miraculin derived from Citrus paradisi, called Citros_Mir, in Pichia pastoris yeast and in Escherichia coli bacteria. Cloning was performed in the propagation vector pGEM-T. Expression in E. coli occur with pET-28a expression vector and the Rosetta strain, in addition to testing temperatures of 20, 30 and 37ºC, and final concentrations of 0.2; 0.4 and 1.0 mM of the IPTG expression inducer. Expression in P. pastoris was performed with the pPICZαC expression vector and the X-33 and KM71H strains. In this system, was test the final concentrations 0.75, 1, 2 and 3% of the methanol expression inducer, concluding that the yeast presents a better expression of proteins in a culture medium containing 2% of methanol. The results obtained showed that attempts to express Citros_Mir in these systems were not efficient, suggesting the need for new tests, modifying conditions and/or expression systems.eng
dc.description.sponsorshipFundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)por
dc.language.isoporpor
dc.publisherUniversidade Federal de São Carlospor
dc.rightsAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazil*
dc.rights.urihttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/*
dc.subjectMiraculinapor
dc.subjectCitrospor
dc.subjectProteína Modificadora Saborpor
dc.subjectAdoçantespor
dc.subjectSweetenerseng
dc.subjectMiraculineng
dc.titleExpressão Recombinante de uma Miraculina de Citrus em Pichia pastoris e em Escherichia colipor
dc.title.alternativeRecombinant Expression of a Citrus Miraculin in Pichia pastoris and Escherichia colieng
dc.typeTCCpor
dc.contributor.advisor1Fuentes, Andrea Soares da Costa
dc.contributor.advisor1Latteshttp://lattes.cnpq.br/2426157257540389por
dc.description.resumoO elevado consumo de açúcar no Brasil e no mundo vem apresentando consequências drásticas à saúde humana, trazendo inúmeras enfermidades. Na busca de alternativas para a diminuição do consumo de açúcar, têm surgido diversos estudos relacionados ao desenvolvimento de adoçantes calóricos e não calóricos, de origem natural ou artificial. Dentre os compostos naturais existe um grupo de proteínas que apresentam a propriedade de modificar o sabor dos alimentos. Dentro dessa classe de moléculas, encontra-se a proteína denominada miraculina, própria da planta Richardella dulcifica, natural da África, a qual detém a propriedade de modificar o sabor ácido dos alimentos em doce. Devido esse potencial, há relatos de diversos ensaios realizados na tentativa de produzir a miraculina através de expressão recombinante em outros organismos. Contudo, outros estudos descobriram a exitência de proteínas semelhantes à miraculina em outras plantas. Em contrapartida, análises in silico permitiram encontrar em Citrus paradisi uma proteína com sequência gênica com alta similaridade àquela encontra encontrada na miraculina original. Sendo assim, a caracterização dessa proteína e a exploração da sua capacidade potencial de modificação de sabor podem resultar em alternativas não calóricas para adoçar comidas ácidas, contribuindo, dessa forma, para uma melhora na saúde humana. Portanto, objetivou-se a expressão recombinante de uma miraculina oriunda de Citrus paradisi, denominada Citros_Mir, em levedura Pichia pastoris e em bactéria Escherichia coli. A clonagem foi realizada no vetor de propagação pGEM-T. Na expressão em E. coli utilizou-se o vetor de expressão pET-28a e a linhagem Rosetta, além de testar as temperaturas de 20, 30 e 37ºC, e as concentrações finais de 0,2; 0,4 e 1,0 mM do indutor de expressão IPTG. A expressão em P. pastoris foi realizada com o vetor de expressão pPICZαC e as linhagens X-33 e KM71H. Nesse sistema, testou-se as concentrações finais 0,75; 1; 2 e 3% do indutor de expressão metanol, concluindo que o sistema de expressão da levedura é mais eficiente em meio de cultivo contendo 2% de metanol. Os resultados obtidos mostraram que as tentativas de expressão da Citros_Mir nesses sistemas não foram eficientes, sugerindo a necessidade de novos testes, modificando as condições e/ou os sistemas de expressão.por
dc.publisher.initialsUFSCarpor
dc.subject.cnpqCIENCIAS BIOLOGICASpor
dc.description.sponsorshipId2021/00718-5por
dc.publisher.addressCâmpus São Carlospor
dc.contributor.authorlatteshttps://lattes.cnpq.br/2138263517599504por
dc.publisher.courseCiências Biológicas - CBpor
dc.contributor.advisor1orcidhttps://orcid.org/0000-0002-7379-1136por


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