dc.contributor.author | Silva, João Pedro Maia de Oliveira da | |
dc.date.accessioned | 2018-04-09T20:32:47Z | |
dc.date.available | 2018-04-09T20:32:47Z | |
dc.date.issued | 2017-09-04 | |
dc.identifier.citation | SILVA, João Pedro Maia de Oliveira da. Análise da expressão gênica e conteúdo proteico de ABCB10, APEX1 e HMGB1 em pacientes com beta talassemia maior e intermediaria. 2017. Dissertação (Mestrado em Genética Evolutiva e Biologia Molecular) – Universidade Federal de São Carlos, São Carlos, 2017. Disponível em: https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/9698. | * |
dc.identifier.uri | https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/9698 | |
dc.description.abstract | Beta thalassemias (BT) are a group of hereditary diseases characterized by the partial or total suppression of beta globin chains synthesis. Clinically, it manifests itself in three distinct forms: minor (BTm), intermedia (BTI) and major (BTM), and are differentiated by the frequency of transfusions, being the most severe form BTM. Since it is known in the literature that BT phenotype occurs independently of the genotype, a study conducted by the group, evaluated globally, genes that were differentially expressed in patients who had the same genotype, but different clinical presentation. By analyzing these results and looking for genes related to the increase of reactive oxygen species (ROS), responsible for causing cell damage and collaborating even more with the reduction of the erythrocyte lifespan observed in these patients, we identified the genes ABCB10, APEX1 and HMBG1 as differentially expressed, the former being increased in BTI patients and the latter two being increased in BTM. Peripheral blood samples extracted from a control group (n = 9), a BTI group (n = 8) and a BTM group (n = 4) were used to perform the real-time PCR experiments; for the experiments with CD34 + cells two healthy cultures and two containing the IVSI-6 mutation were used on the 7th, 10th and 13th days; A control group (n = 4), a BTI group (n = 5) and a BTM group (n = 6) were used to determine the protein content of APEX1, and a control group (n = 4) ) and a BTI group (n = 5) for the HMGB1 experiment. The data were analyzed using the GraphPad Prism 6 software and considered significant values of p <0.005. Using the real-time PCR technique (qPCR), we confirmed these results in a larger number of patients. The ABCB10 gene, on average, was 5 times more expressed in BTI patients (p = 0.0077). The APEX1 and HMGB1 genes were differentially expressed in patient BTM (both 3 times). Analyzing the expression of these genes during differentiation of thalassemic beta cells in CD34 + cell culture, compared to healthy cells, by real-time PCR, we found an increase in ABCB10 expression and a decrease in APEX1 and HMGB1 at the end of the differentiation. A protein analysis using western blot indicated that the protein content of APEX1 is increased in the two phenotypes of BT indicating its relation to the disease independent of the phenotype. Since erythroid cells did not show detectable amounts of HMGB1 in the cytoplasm, it was analyzed in the plasma of healthy individuals and BTI, showing a significant increase of this protein in patients. In this way, we conclude that our results contribute with unpublished data for the literature and can show in the case of differential expression of ABCB10, a more efficient response against oxidative stress, besides an important role in the erythroid differentiation in BTI patients. The higher production of APEX1 in beta-thalassemic patients seems to be independent of the phenotype being associated with the disease and related to the increase of oxidative stress observed in these patients. Finally, increased secretion of HMGB1 in the plasma of patients may be associated with prolonged inflammatory conditions, contributing to systemic cytotoxicity. The data presented here contribute to a better understanding of the disease, pointing out new targets for future studies. | eng |
dc.description.sponsorship | Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) | por |
dc.description.sponsorship | Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) | por |
dc.language.iso | por | por |
dc.publisher | Universidade Federal de São Carlos | por |
dc.rights.uri | Acesso aberto | por |
dc.subject | Beta talassemia | por |
dc.subject | Anemia hemolítica | por |
dc.subject | APEX1 | por |
dc.subject | HMGB1 | por |
dc.subject | ABCB10 | por |
dc.subject | Expressão gênica | por |
dc.subject | Estresse oxidativo | por |
dc.subject | Estrés oxidativo | spa |
dc.subject | Expresión génica | spa |
dc.subject | Oxidative stress | eng |
dc.subject | Gene expression | eng |
dc.subject | Hemolytic anemia | eng |
dc.subject | Beta thalassemia | eng |
dc.title | Análise da expressão gênica e conteúdo proteico de ABCB10, APEX1 e HMGB1 em pacientes com beta talassemia maior e intermediaria | por |
dc.title.alternative | Analysis of gene expression and protein content of ABCB10, APEX1 and HMGB1 in patients with beta thalassemia major and intermediaria | eng |
dc.type | Dissertação | por |
dc.contributor.advisor1 | Cunha, Anderson Ferreira da | |
dc.contributor.advisor1Lattes | http://lattes.cnpq.br/0329741640375661 | por |
dc.description.resumo | As beta talassemias (BT), são um grupo de doenças hereditárias caracterizadas pela supressão parcial ou total na síntese das cadeias de beta globina. Clinicamente, manifesta-se de três formas distintas: menor (BTm), intermediária (BTI) e maior (BTM), e são diferenciadas pela frequência de transfusões, sendo a forma mais grave a BTM. Sendo conhecido na literatura que o fenótipo das BT ocorre independente do genótipo, um estudo realizado pelo grupo, avaliou globalmente genes com expressão diferencial em pacientes que apresentavam o mesmo genótipo, mas quadros clínicos distintos. Analisando estes resultados e procurando genes relacionados ao aumento de espécies reativas de oxigênio (EROs), responsáveis por causar danos as células e colaborando ainda mais com a redução do tempo de vida dos eritrócitos, observado nestes pacientes, identificamos os genes ABCB10, APEX1 e HMBG1 como diferencialmente expressos, sendo o primeiro aumentado em pacientes BTI e os dois últimos em BTM. Para os experimentos de PCR em tempo real (qPCR) foram utilizadas amostras de sangue periférico extraídas de um grupo controle (n=9), um grupo BTI (n=8) e um grupo BTM (n=4); para os experimentos com células CD34+ foram utilizados duas culturas saudáveis e duas contendo a mutação IVSI-6 coletadas no 7º, 10º e 13º dia; para realização dos wetern blottings, foram utilizados um grupo controle (n=4), um grupo BTI (n=5) e um grupo BTM (n=6) para determinar o conteúdo proteico de APEX1, e um grupo controle (n=4) e um grupo BTI (n=5) para o experimento com HMGB1. Os dados foram analisados através do software GraphPad Prism 6, e considerados significantes valores de p<0,005. Através de qPCR, confirmamos estes resultados em um número maior de pacientes. O gene ABCB10, apresentou-se em média 5 vezes mais expresso nos pacientes BTI (p=0,0077). Já os genes APEX1 e HMGB1 apresentaram-se aumentados no paciente BTM (ambos 3 vezes). Analisando a expressão destes genes durante a diferenciação de células beta talassêmicas em cultura de células CD34+, comparadas a células sadias, através de qPCR, verificamos um aumento da expressão de ABCB10 e uma diminuição de APEX1 e HMGB1 ao fim da diferenciação. Uma análise proteica utilizando western blot indicou que o conteúdo proteico de APEX1 se encontra aumentado nos dois fenótipos estudados da BT. Uma vez que células eritróides não apresentaram quantidades detectáveis de HMGB1 no citoplasma, foi feita a analise deste no plasma de indivíduos sadios e BTI, mostrando um aumento importante desta proteína em pacientes. Desta forma, conclui-se que, a expressão diferencial de ABCB10, pode estar ligada a uma resposta mais eficiente contra o estresse oxidativo, além de um importante papel na diferenciação eritróide em pacientes BTI. A maior produção de APEX1 em pacientes beta talassêmicos, parece ser independente do fenótipo estando associada com a doença e relacionada ao aumento de estresse oxidativo observado nestes pacientes. Finalmente, o aumento de secreção de HMGB1 no plasma de pacientes pode estar associado aos quadros inflamatórios prolongados, contribuindo para a citotoxicidade sistêmica. Os dados aqui apresentados contribuem para um melhor entendimento da doença, apontando novos alvos para estudos futuros. | por |
dc.publisher.initials | UFSCar | por |
dc.publisher.program | Programa de Pós-Graduação em Genética Evolutiva e Biologia Molecular - PPGGEv | por |
dc.subject.cnpq | CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA::BIOLOGIA MOLECULAR | por |
dc.subject.cnpq | CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA | por |
dc.subject.cnpq | CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA::GENETICA HUMANA E MEDICA | por |
dc.description.sponsorshipId | CAPES: 1481907 | por |
dc.ufscar.embargo | Online | por |
dc.publisher.address | Câmpus São Carlos | por |
dc.contributor.authorlattes | http://lattes.cnpq.br/7137476898225863 | por |