dc.contributor.author | Santiago, Adelita Carolina | |
dc.date.accessioned | 2018-04-10T23:57:40Z | |
dc.date.available | 2018-04-10T23:57:40Z | |
dc.date.issued | 2018-03-02 | |
dc.identifier.citation | SANTIAGO, Adelita Carolina. Cistatinas recombinantes de cana-de-açúcar : especificidade, produção em biorreator e conservação por liofilização. 2018. Tese (Doutorado em Genética Evolutiva e Biologia Molecular) – Universidade Federal de São Carlos, São Carlos, 2018. Disponível em: https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/9718. | * |
dc.identifier.uri | https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/9718 | |
dc.description.abstract | Phytocystatins are inhibitors of cysteine peptidases found naturally in plants.
Sugarcane cystatins are distinguished by their high inhibitory activity and possible
biotechnological applications. In this work, a comparative panel of the inhibitory
activities of CaneCPIs 1, 2, 3, 4, 5, and 6 against relevant human cathepsins and a
cathepsin L of the sugarcane weevil, Sphenophorus levis, demonstrated the
inhibitory efficiency of these cystatin. From this panel it was possible to observe that
CaneCPIs 4 and 5 have potent inhibitory activity with very low Ki values for all
cathepsins tested. Due to the insolubility of CaneCPI-4 produced in E. coli, Cterminal mutations were performed to make it more soluble, but were not able to alter
solubility of the protein, but rather its inhibitory capacity. CaneCPI-4 was also
expressed in Pichia pastoris. An increase in scale was carried out for the production
of CaneCPIs 4 and 5 in bioreactor, and CaneCPI-5 was successfully expressed and
used in a study that showed its ability to adhesion to dental enamel and protection
against acid erosion. CaneCPI-4 was subjected to lyophilization with different
stabilizers and it was shown to be stable even without the use of them, proving that
this cystatin is quite stable even under stressful conditions for the molecule.
Therefore, this study demonstrates the inhibitory potential of CaneCPIs, the
possibility of producing them in bioreactor and of being lyophilized, all this information
is important for a future industrial production and commercial use of sugarcane
cystatin for various biotechnological purposes. | eng |
dc.description.sponsorship | Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) | por |
dc.language.iso | por | por |
dc.publisher | Universidade Federal de São Carlos | por |
dc.rights.uri | Acesso aberto | por |
dc.subject | Cistatina | por |
dc.subject | Fitocistatinas | por |
dc.subject | Cisteíno peptidases | por |
dc.subject | Cana-de-açúcar | por |
dc.subject | Biorreator | por |
dc.subject | Liofilização | por |
dc.subject | Cystatin | eng |
dc.subject | Phytocystatins | eng |
dc.subject | Cysteine peptidases | eng |
dc.subject | Sugarcane | eng |
dc.subject | Bioreactor | eng |
dc.subject | Freeze-drying | eng |
dc.title | Cistatinas recombinantes de cana-de-açúcar : especificidade, produção em biorreator e conservação por liofilização | por |
dc.type | Tese | por |
dc.contributor.advisor1 | Silva, Flávio Henrique da | |
dc.contributor.advisor1Lattes | http://lattes.cnpq.br/1757309852446263 | por |
dc.description.resumo | As fitocistatinas são inibidores de cisteíno peptidases encontradas
naturalmente em plantas. As cistatinas de cana-de-açúcar destacam-se pela sua alta
atividade inibitória e possíveis aplicações biotecnológicas. Neste trabalho, um painel
comparativo das atividades inibitórias das CaneCPIs 1, 2, 3, 4, 5 e 6 contra
relevantes catepsinas humanas e uma catepsina L de um inseto praga da cana-deaçúcar, Sphenophorus levis, demonstrou a eficiência inibitória destas cistatinas. A
partir deste painel foi possível observar que as CaneCPIs 4 e 5 possuem potente
atividade inibitória com valores de Ki bastante baixos para todas as catepsinas
testadas. Devido a insolubilidade da CaneCPI-4 produzida em E. coli, mutações no
C-terminal foram realizadas para torná-la mais solúvel, porém não foram capazes de
alterar sua solubilidade, mas sim sua capacidade inibitória. A CaneCPI-4 também foi
expressa em Pichia pastoris. Um aumento de escala foi realizado para a produção
das CaneCPIs 4 e 5 em biorreator, sendo a CaneCPI-5 expressa com sucesso e
utilizada em um trabalho que mostrou sua capacidade de adesão ao esmalte
dentário e proteção contra a erosão ácida. A CaneCPI-4 foi submetida à liofilização
com diferentes estabilizadores e mostrou-se estável mesmo sem o uso dos mesmos,
provando que essa cistatina é bastante estável mesmo em condições estressantes
para a molécula. Portanto, neste trabalho é demonstrado o potencial inibitório das
CaneCPIs, a possibilidade de produzí-las em biorreator e de serem liofilizadas, todas
essas informações são importantes para uma futura produção industrial e uso
comercial das cistatinas de cana-de-açúcar para diversos fins biotecnológicos. | por |
dc.publisher.initials | UFSCar | por |
dc.publisher.program | Programa de Pós-Graduação em Genética Evolutiva e Biologia Molecular - PPGGEv | por |
dc.subject.cnpq | CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA::BIOLOGIA MOLECULAR | por |
dc.ufscar.embargo | Online | por |
dc.publisher.address | Câmpus São Carlos | por |
dc.contributor.authorlattes | http://lattes.cnpq.br/8140765349742143 | por |