dc.contributor.author | Araque, Camilo Orozco | |
dc.date.accessioned | 2018-04-26T13:29:20Z | |
dc.date.available | 2018-04-26T13:29:20Z | |
dc.date.issued | 2018-02-20 | |
dc.identifier.citation | ARAQUE, Camilo Orozco. Produção heteróloga de inibidores de pectina metil esterase (PMEI), para ensaios de inibição com PME e Invertase, enzimas intestinais do Sphenophorus levis. 2018. Dissertação (Mestrado em Genética Evolutiva e Biologia Molecular) – Universidade Federal de São Carlos, São Carlos, 2018. Disponível em: https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/9822. | * |
dc.identifier.uri | https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/9822 | |
dc.description.abstract | The pectin is a fundamental part of the cell wall from plants and it is composed mainly by 4 polysaccharides. The polysaccharide most abundant is the homogalacturonan (HG) representing up to 65% from pectin, and it is a homopolymer of galacturonic acid, mainly methyl esterified. The HG is a substrate for pectin remodeling enzymes, also called pectinases. The pectinase that participates in the first phase of pectin degradation is the Pectin Methylesterase (PME) (E.C.3.1.1.1.1). This enzyme catalyzes the hydrolysis of two groups methyl ester of the principal chain of HG. In previous works of our laboratory we identified and characterized a PME (Sl-PME) in a cDNA library of the sugarcane weevil, Sphenhophorus levis. The PMEs from plants can be inhibited by endogenous inhibitors from plants, the Pectin Methylesterase Inhibitors (PMEIs). The inhibition is achieved by the formation of a pH dependent 1.1 complex. Until now there is no report of an inhibition the insects PMEs by plants PMEIs, which was tested in this work. On the other our laboratory also identified an S. levis invertase, called Sl-invertase. The Sl-invertase has digestive function and hidrolise the sacarore. Structurally PMEIs share high identity with invertase inhibitors (INH). That inhibitors comprise a large plant protein family known as PMEI-related proteins (PMEI-RP). Therefore we also decide to investigate the inhibition of Sl-invertase by PMEIs. Inhibitors from four species of plants: Actinidia deliciosa (Kiwi), Saccharum hybrid (Sugar cane), Solanum lycopersicum (Tomato) e Vitis americana (Grape) were cloned and recombinantly produced in the yeast Pichia pastoris. The Sl-PME and Sl-invertase were also were expressed in the yeast P. pastoris. Neither the inhibitors inhibited the Sl-PME activity, although a complex of Sl-PME and sugarcane PMEI was identified in vitro. Regarding the Sl-invertase it was significantly inhibited by the PMEIs from tomato (20%) and sugar cane (40%). | por |
dc.description.sponsorship | Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) | por |
dc.language.iso | por | por |
dc.publisher | Universidade Federal de São Carlos | por |
dc.rights.uri | Acesso aberto | por |
dc.subject | Pectina Metil Esterase (PME) | por |
dc.subject | Sphenophorus levis | por |
dc.subject | Inibidores de Pectina Metil Esterase (PMEIs) | por |
dc.subject | Pectinases | por |
dc.subject | Herbivoria | por |
dc.subject | Invertase | por |
dc.title | Produção heteróloga de inibidores de pectina metil esterase (PMEI), para ensaios de inibição com PME e Invertase, enzimas intestinais do Sphenophorus levis | por |
dc.type | Dissertação | por |
dc.contributor.advisor1 | Silva, Flávio Henrique da | |
dc.contributor.advisor1Lattes | http://lattes.cnpq.br/1757309852446263 | por |
dc.description.resumo | A pectina é parte fundamental da parede celular das plantas e é composta principalmente por 4 polissacarídeos. O polissacarídeo mais abundante é o homogalacturano (HG), que representa 65% da pectina e é um homopolímero de ácido galacturônico, predominantemente metilesterificado. O HG é substrato para muitas enzimas pectina-modificadoras, também chamadas pectinases. A pectinase que participa na primeira parte da degradação da pectina é a Pectina Metil Esterase (PME) (E.C 3.1.1.1.1). Esta enzima catalisa a hidrólise de dois grupos metil ester da cadeia principal de HG. Em trabalhos anteriores realizados em nosso laboratório foi gerada uma biblioteca de cDNA de um inseto praga da cana-de-açúcar, o coleóptero Sphenophorus levis, na qual foi identificada uma PME, nomeada Sl-PME. A Sl-PME pode ser parte de um arsenal enzimático que possue o inseto, e poderia determinar o potencial patogênico do organismo invasor. As PME de plantas podem ser inibidas por inibidores endógenos proteicos de plantas, os inibidores de pectina metil Esterase (PMEI). Sua inibição é conseguida pela formação de um complexo 1:1 dependente de pH. Até o momento, não existe relato de inibição das PME de insetos por PMEI de plantas, o que foi testado neste presente trabalho. Por outro lado, nosso laboratório também identificou uma invertase de S. levis, nomeada de Sl-invertase. A Sl-Invertase tem função digestiva e atua na hidrólise de sacarose. Os inibidores de invertase (INH) e os PMEI compartilham semelhança estrutural. Esses inibidores constituem uma família chamada de proteínas PMEI-relacionadas (PMEI-RP). Por isso, resolvemos também realizar testes de inibição da Sl-invertase usando os PMEI. Inibidores de quatro espécies de plantas: Actinidia deliciosa (Kiwi), Saccharum hybrid (Cana-de-açúcar), Solanum lycopersicum (Tomate) e Vitis americana (Uva) foram clonados, produzidos de forma recombinante na levedura Pichia pastoris e testados quanto à inibição da Sl-PME e Sl-invertase, também produzidas na levedura P. pastoris. Nenhum dos inibidores foi capaz de inibir a atividade da Sl-PME, ainda que tenhamos verificado, utilizando o PMEI de cana-de-açúcar, que forma-se um complexo PME-PMEI, o que, no entanto, não deve afetar o sítio catalítico da enzima. Quanto à Sl-invertase, ela teve porcentagens de inibição (20 e 40%) na presença dos PMEI de tomate e de cana-de-açúcar respectivamente. | por |
dc.publisher.initials | UFSCar | por |
dc.publisher.program | Programa de Pós-Graduação em Genética Evolutiva e Biologia Molecular - PPGGEv | por |
dc.subject.cnpq | CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA::BIOLOGIA MOLECULAR | por |
dc.ufscar.embargo | Online | por |
dc.publisher.address | Câmpus São Carlos | por |
dc.contributor.authorlattes | http://lattes.cnpq.br | por |