Caracterização funcional de proteínas do Sistema Ubiquitina-Proteassoma de L. infantum.

Abstract

O Sistema Ubiquitina-Proteassoma (SUP) é o principal responsável pela proteólise intracelular em eucariotos, sendo composto pelas enzimas E1 (ativadora de ubiquitina), E2 (carreadora de ubiquitina), E3 (ubiquitina ligases) e o proteassoma, uma estrutura catalítica capaz de degradar a proteínas ubiquitinadas. O SUP é essencial para a alternância de hospedeiros em protozoários parasitas Leishmania, responsáveis por causar a leishmaniose. Apesar de sua importância, os componentes do SUP são pobremente caracterizados em Leishmania spp., particularmente Leishmania infantum, o agente causador da leishmaniose visceral no Brasil. Neste estudo, foram gerados mutantes nulos de onze genes codificantes de proteínas relacionados ao SUP de L. infantum, sendo sete relacionadas às E3 ubiquitina ligases da classe LinfCRL1 (LinfFLP1, LinfFLP2, LinfFLP3, LinfFLP4, LinfFLP5, LinfFLP6 e LinfNEDD8) e quatro relacionados ao Ribosomal Quality Control (RQC), sendo eles: LinfLTN1, LinfPirh2, LinfKLHDC10 e LinfHLTF. Um total de sete linhagens viáveis foram confirmadas por PCR, sendo elas: ΔLinfFLP1, ΔLinfFLP2, ΔLinfFLP5, ΔLinfFLP6, ΔLinfLTN1, ΔLinfPirh2 e ΔLinfHLTF. Análises de proliferação celular indicaram redução no perfil de crescimento da linhagem ΔLinfLTN1, nocaute para o gene codificante da proteína ortóloga a Listerin de H. sapiens. A análise estrutural comparativa entre estas proteínas demonstrou alta similaridade, arguindo sobre papel funcional semelhante. O nocaute dos genes LinfNEDD8, LinfKLHDC10 e LinfFLP3 não gerou linhagens viáveis, sugerindo que esses genes podem ser essenciais ao parasita. A análise estrutural das proteínas LinfKLHDC10 e KLHDC10 de H. sapiens evidenciou topologia semelhante, sugerindo relação funcional destas proteínas nestes organismos. Assim, os resultados deste projeto demonstram a importância dos componentes do SUP na proliferação e viabilidade de L. infantum, com destaque para LinfLTN1 e LinfKLHDC10 que apresentam características estruturais similares às proteínas de H. sapiens, e LinfNEDD8 e LinfFLP3 que são potencialmente essenciais ao parasita.